Identificação da segurança e potencial aplicação clínica de nanopartículas contendo inibidor de tripsina isolado de sementes de tamarindo (Tamarindus indica L.)

• Autor(a) principal: Costa, Rafael Oliveira de Araújo
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFRN
• Texto Completo: https://repositorio.ufrn.br/jspui/handle/123456789/27159
• topic: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA; Encapsulação; Nanopartícula; Atividade antitríptica; CCD18- Co; Caco-2; Ratos Wistar

Moléculas naturais com ação bioativa, tais como o inibidor de tripsina isolado de sementes de tamarindo (Tamarindus indica L.) (ITT), destaca-se entre os agentes sacietogênicos e anti-inflamatórios estudados na atualidade. Nessa perspectiva, visando manter o ITT intacto e protegido ao longo do trato gastrointestinal, foi realizada a encapsulação por nanoprecipitação em quitosana purificada e proteína de soro de leite isolada, e as partículas (EQPI) foram caracterizadas por diferentes técnicas. Para isso, porém, precisa ser avaliada a segurança, visando possíveis aplicações clínicas. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi avaliar a citoxicidade e toxicidade sanguínea subaguda da dose bioativa do EQPI em ratos Wistar, alimentados com dieta de alto índice glicêmico. O ITT foi obtido com base no fracionamento proteico, utilizando sulfato de amônio. A fração com maior atividade inibitória contra tripsina, fracionamento de 30-60%, foi isolada por Cromatografia de Afinidade em Tripsina-Sepharose, e utilizada para síntese de nanopartículas. O EQPI foi sintetizado, respeitando a proporção de ITT, quitosana purificada e proteína isolada do soro do leite de 1:2:2 p/p/p, respectivamente, sendo posteriormente caracterizado por diferentes análises físicas e químicas. E avaliado quanto à interação entre o ITT e os agentes encapsulantes em pH neutro (água) e em pH ácido, por meio de diversas etapas de filtração em Amicon® 100 K, sendo monitorado pela atividade antitríptica. Adicionalmente, foi avaliado a citotoxicidade do EQPI em diferentes concentrações (0,5, 2,5 e 5 mg/mL) por meio do ensaio de resazurina, utilizando duas linhagens celulares, (Caco-2 e CCD-18Co), além da toxicidade sanguínea (hemograma, função hepática e renal) em ratos Wistar macho (n = 10), alimentados com dieta de alto índice glicêmico e, administrado com EQPI (12,5 mg/Kg) por 10 dias. O EQPI apresentou partículas esféricas com superfície lisa de acordo com a Microscopia Eletrônica de Varredura, diâmetro médio de 118 nm (17.27), índice de polidispersão de 0.373 (0.02), carga superficial de -38.26 mV (0.15) e, eficiência de encapsulação de 95.3% (0.31). Quanto à interação em água do ITT e dos agentes encapsulantes por meio da avaliação da atividade antitríptica, utilizando Amicon® 100 K, observou-se que, o EQPI protegeu o ITT e o manteve aprisionado. No entanto, em pH ácido ocorreu uma liberação gradual do ITT, sendo evidenciada pela forte interação entre o ITT e os agentes encapsulantes utilizados neste estudo. O ensaio de citotoxicidade apontou alta viabilidade celular (>70%) para Caco-2 e CCD-18Co, quando exposta ao EQPI avaliado em diferentes concentrações. Quanto à toxicidade sanguínea subaguda do EQPI, administrado em ratos Wistar, também não foram demonstrados efeitos tóxicos de acordo com os resultados obtidos para os parâmetros bioquímicos avaliados. Neste estudo, o EQPI se mostrou eficiente em proteger o ITT quando disperso em água e exposto ao pH ácido. As concentrações de EQPI, avaliadas em células e no modelo experimental, não demonstraram sinais de toxicidade, sugerindo a aplicação segura dessas partículas e provável efeito hepatoprotetor. Assim, assegurando a sua aplicação em estudos complementares para investigar a eficácia no tratamento da obesidade e suas complicações.