Estabelecimento de esferoides multicelulares tipo tecido adiposo: aspectos morfo-funcionais da adipogênese

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Dal Mora, Tamara
Data de Publicação: 2018
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFSC
Texto Completo: https://repositorio.ufsc.br/handle/123456789/191943
Resumo: Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2018.
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spelling Estabelecimento de esferoides multicelulares tipo tecido adiposo: aspectos morfo-funcionais da adipogêneseFarmáciaObesidadeTecido adiposoDissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2018.Considerada uma doença multifatorial, a obesidade ocorre devido à interação entre fatores genéticos, comportamentais, fisiológicos, ambientais, sociais e econômicos. O aumento dos casos de obesidade está relacionado com o aumento da prevalência de diabetes mellitus tipo 2, doenças cardiovasculares e alguns tipos de câncer. O envolvimento do tecido adiposo, considerado um órgão endócrino complexo, aumenta a importância de uma melhor compreensão do seu estado metabólico a nível celular. Assim, os modelos tridimensionais (3D) in vitro poderiam representar uma nova alternativa aos clássicos modelos de cultura in vitro e fornecer novos conhecimentos sobre o estudo da obesidade e doenças relacionadas à obesidade. Sendo assim, desenvolveu-se um modelo in vitro 3D utilizando três linhagens celulares que são constituintes do tecido adiposo nativo (pré-adipócitos, fibroblastos e macrófagos). Foram obtidos modelos de mono e co-culturas em placa de 96 poços revestida com gel de agarose 2% em uma densidade de 1,2×104 células/poço. Após 4 dias de cultura em condições padrões, os esferoides foram expostos ao meio de diferenciação adipogênica (MDI) ou mantidos em meio controle. O tempo total de cultura 3D foi de 11 dias e, ao final deste período, os esferoides foram corados com Nile red, um marcador fluorescente seletivo para gotículas lipídicas intracelulares. De acordo com os resultados, obteve-se esferoides homogêneos em diâmetro e forma nos modelos de mono e co-cultura. Os esferoides formados em meio controle apresentaram menor diâmetro do que os expostos ao MDI, sugerindo que o MDI é um estímulo de crescimento adicional que também refletiu sobre viabilidade celular. Além disso, as análises de citometria de fluxo e microscopia confocal mostraram que os esferoides formados em meio controle apresentaram diferenciação adipogênica sem estímulos hormonais, demonstrando que as células cultivadas no modelo 3D exerceram auto-diferenciação. Adicionalmente, os modelos de co-cultura analisados produziram e liberaram óxido nítrico, sugerindo que o processo de diferenciação adipogênica ocorrido contribuiu para a formação de um modelo 3D com perfil inflamatório. Em conclusão, foi possível desenvolver um modelo 3D tipo tecido adiposo que pode ser usado para estudar novas vias metabólicas e novos alvos terapêuticos para a terapia da obesidade e doenças relacionadas à obesidade sem o estímulo hormonal clássico usado em sistemas de cultura celular in vitro convencional.Abstract : Considered a multifactorial disease, obesity occurs due to the interaction among genetic, behavioral, physiological, environmental, social and economic factors. The increase in obesity cases is related to the increase in the prevalence of type 2 diabetes mellitus, cardiovascular diseases, and some cancers. The involvement of the adipose tissue, considered a complex endocrine organ, raises the importance for a better understanding of its metabolic state at a cellular level. Thus, three-dimensional (3D) in vitro models could represent a new alternative to the classic in vitro culture models and provide new insights on the study of obesity and obesity-related diseases. Thus, an in vitro 3D model was developed using three cell lines that are constituents of the native adipose tissue (pre-adipocyte, fibroblasts and macrophages). Mono and co-cultures were obtained in a 96-well plate coated with 2% agarose gel at a density of 1.2×104 cells/well. After 4 days of culture in standard conditions, the spheroids were exposed to the adipogenic differentiation medium (MDI) or maintained in control medium. The total 3D culture time was 11 days, and at the end of this period, the spheroids were stained with Nile red, a fluorescent marker selective for intracellular lipid droplets. According to the results, homogeneous spheroids were obtained in diameter and shape in the mono and co-culture models. Spheroids formed in control medium exhibited smaller diameter than MDI-treated spheroids, suggesting that MDI is an additional growth stimulus that also reflected on cell viability. In addition, flow cytometry and confocal microscopy analyzes showed that the spheroids formed in the control medium showed adipogenic differentiation without hormonal stimuli, demonstrating that the cells cultured in the 3D model exerted self-differentiation. Additionally, the analyzed co-culture models produced and released nitric oxide, suggesting that the adipogenic differentiation process that occurred contributed to the formation of a 3D model with an inflammatory profile. In conclusion, it was possible to develop an adipose tissue-like 3D model that can be used to study new metabolic pathways and new therapeutic targets for to the therapy of obesity and obesity-related diseases without the classical hormonal stimuli used in conventional in vitro cell culture systems.Filippin, Fabíola BrancoUniversidade Federal de Santa CatarinaDal Mora, Tamara2018-12-06T03:05:37Z2018-12-06T03:05:37Z2018info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesis106 p.| il., gráfs., tabs.application/pdf355013https://repositorio.ufsc.br/handle/123456789/191943porreponame:Repositório Institucional da UFSCinstname:Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC)instacron:UFSCinfo:eu-repo/semantics/openAccess2018-12-06T03:05:37Zoai:repositorio.ufsc.br:123456789/191943Repositório InstitucionalPUBhttp://150.162.242.35/oai/requestopendoar:23732018-12-06T03:05:37Repositório Institucional da UFSC - Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC)false
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