Caracterização estrutural e funcional da isoforma glutationa s-transferase ômega 2.1, recombinante, de ostra Crassostrea gigas (Thunberg, 1793)

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Vilas Bôas, Luiz Otávio de Barros
Data de Publicação: 2022
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFSC
Texto Completo: https://repositorio.ufsc.br/handle/123456789/235030
Resumo: Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2022.
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spelling Caracterização estrutural e funcional da isoforma glutationa s-transferase ômega 2.1, recombinante, de ostra Crassostrea gigas (Thunberg, 1793)BioquímicaGlutationaOstra-do-pacíficoDissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2022.Ferramentas de biomonitoramento ambiental, como os biomarcadores, são necessárias para a identificação, avaliação e remediação do impacto antrópico em ambientes aquáticos. Enzimas dos sistemas de biotransformação de fase II, como as Glutationa S-transferases (GST), estão entre os biomarcadores clássicos. Crassostrea gigas é a ostra mais cultivada do mundo e devido às suas características como organismo filtrante, séssil de ampla distribuição geográfica, tem sido frequentemente utilizada em estudos com biomarcadores. Mesmo que as GST sejam enzimas comumente estudadas em diversas espécies, pouco se sabe sobre esta família de proteínas em C. gigas. Em virtude de significativas mudanças na transcrição de genes e de atividade enzimática de GSTs da classe ômega, em ostras de aquicultura e ambientes naturais, ou expostas a hidrocarbonetos, diferentes salinidades e pH, em condições laboratoriais, o presente estudo teve como objetivo caracterizar estrutural e funcionalmente a GST Ômega 2.1 da ostra do Pacífico Crassostrea gigas (CgGSTO2.1), número de acesso XP_011429380.2 (NCBI). Um modelo tridimensional in silico dimérico foi construído para esta sequência. As análises de docking molecular geraram estimativas da afinidade por ligantes (?G) com os substratos Glutationa (GSH), Glutationa S-(2,4 dinitrobenzeno) (GDN) e Dehidroascorbato (DHA). Os valores de ?G sugerem maiores interações para GSH e GDN com GST ômega de C. gigas por meio dos resíduos Cisteína 28 (Cis28) e Lisina 55 (Lis55). Além disso, a proteína recombinante foi expressada, purificada, e uma fração foi obtida para testes de atividade. Os testes com CDNB demonstraram taxa de absorbância diferente do branco, sugerindo atividade GST, diferente da DHA, que demonstrou taxa de absorbância semelhante ao controle negativo. Novos ensaios in vitro com novas condições devem ser realizados, uma vez que as análises in silico sugerem a utilização de ambos substratos pela CgGSTO2.1.Abstract: Environmental biomonitoring tools, such as biomarkers, are necessary for the identification, assessment and remediation of human impact in aquatic environments. Enzymes of phase II biotransformation systems, such as Glutathione S-transferases (GST), are among the classic biomarkers. Crassostrea gigas is the most cultivated oyster in the world and due to its characteristics as a filtering, sessile organism and wide geographic distribution, it has been frequently used in studies with biomarkers. Even though GSTs are enzymes commonly analyzed in several species, little is known about this family in C. gigas. Due to significant changes in gene transcription and enzymatic activity of omega class GSTs, in oysters from aquaculture and natural environments, or exposed to hydrocarbons, different salinities and pH, under laboratory conditions, the present study aimed to characterize structurally and functionally the Omega 2.1 GST of the Pacific oyster Crassostrea gigas (CgGSTO2.1), accession number XP_011429380.2 (NCBI). A three-dimensional dimeric in silico model was constructed from this sequence. Molecular docking analyzes generated estimates of ligand affinity (?G) with the substrates Glutathione (GSH), Glutathione S-(2,4 dinitrobenzene) (GDN) and Dehydroascorbate (DHA). The ?G values suggest greater interactions for GSH and GDN with GST omega from C. gigas through residues Cys28 and Lys55. In addition, the recombinant protein was expressed, purified, and a fraction was obtained for activity tests. Tests with CDNB showed an absorbance rate different from the blank, suggesting GST activity. DHA showed a very low absorbance rate similar to the negative control. New in vitro assays with new conditions should be performed, since in silico analyzes suggest the use of both substrates by CgGSTO2.1.Bainy, Afonso Celso DiasMaciel, Guilherme RazzeraUniversidade Federal de Santa CatarinaVilas Bôas, Luiz Otávio de Barros2022-05-20T18:21:54Z2022-05-20T18:21:54Z2022info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesis64 p.| il., gráfs.application/pdf375981https://repositorio.ufsc.br/handle/123456789/235030porreponame:Repositório Institucional da UFSCinstname:Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC)instacron:UFSCinfo:eu-repo/semantics/openAccess2022-05-20T18:21:54Zoai:repositorio.ufsc.br:123456789/235030Repositório InstitucionalPUBhttp://150.162.242.35/oai/requestopendoar:23732022-05-20T18:21:54Repositório Institucional da UFSC - Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC)false
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