Busca por novas estratégias terapêuticas pela inibição de enzimas modificadoras de histonas em características malignas de células de melanoma de diferentes fenótipos

• Autor(a) principal: Silva, Carolina de Sousa Castro [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2023
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/69841
• topic: Melanoma; Terapia Epigenética; Histonas

O melanoma cutâneo é o câncer resultante da transformação maligna dos melanócitos, células produtoras de melanina, sendo considerado o câncer de pele mais grave devido a sua alta resistência terapêutica e propensão a metástases. Como melanomas primários e metastáticos possuem, em parte, o mesmo conjunto de mutações driver, a reprogramação epigenética parece desempenhar papel importante na progressão, heterogeneidade e plasticidade tumoral. Dentre os mecanismos epigenéticos, que resultam da interação da célula com o microambiente tumoral, as modificações pós-traducionais em histonas são responsáveis por modular a organização da cromatina, sendo fator chave na regulação da transcrição gênica. Apesar dos avanços, o conhecimento acerca dos mecanismos epigenéticos envolvidos na plasticidade celular é ainda incompleto. Dados prévios de nosso laboratório de um modelo celular linear de progressão tumoral associam padrões de abundância de diferentes modificações de histonas e a expressão de deacetilases (HDACs), metiltransferases (HMTs) e desmetilases (HDMs) de histonas a fenótipos celulares distintos do melanoma, sendo eles mesenquimal-like/indiferenciado e diferenciado/altamente proliferativo. Estudos que avaliam o uso de inibidores de metiltransferases, desmetilases e deacetilases de histonas em melanomas ainda são escassos, mas têm se mostrado bastante promissores, inclusive quando utilizados em combinação com outras terapias. Foram selecionados inibidores de enzimas modificadoras de histonas que estão alteradas durante a progressão do modelo celular de melanoma: Entinostat, inibidor de HDACs classe I; A196, inibidor das metiltransferases SUV420H1/H2 e NSC636819, inibidor das desmetilases KDM4A e KDM4B. Após definição da concentração inibitória média de cada composto, realizamos análise proteica por ensaio de Western Blot, que confirmou a reversão do padrão da marca de histona alvo pelos três inibidores. Células expostas ao Entinostat tiveram diminuição acentuada na capacidade clonogênica enquanto células expostas ao NSC636819 apresentaram singela diminuição. Células 4C11+ expostas ao Entinostat ou A196 apresentaram maior taxa de migração coletiva, enquanto células 4C11- expostas ao Entinostat apresentaram menor migração coletiva. Aumento na quebra de dupla-fita de DNA foi observado em células expostas aos três inibidores. Apenas o tratamento combinado entre Entinostat e dacarbazina ou inibidor de MEK demonstrou efeito sinérgico na inibição da viabilidade celular. Observou-se diminuição de células na fase G0/G1 do ciclo celular quando expostas a NSC636819. No ensaio in vivo de tumorigenicidade, nenhuma diferença significativa foi observada entre animais controle ou tratados com os três inibidores, mas ocorreram imprevistos no processo experimental. Foi demonstrado que a inibição de HDACs de classe I pelo Entinostat também ocorre in vivo com tratamento via gavagem oral, refletido no aumento de H4K8ac nas amostras tumorais de animais tratados. No ensaio in vivo de metástase, observou-se um singelo aumento nas colônias metastáticas em animais C57BL/6 tratados com o Entinostat, e uma leve diminuição em animais tratados com NSC636819. No ensaio de tumorigenicidade com a terapia combinada entre Entinostat e PD0325901, observamos um efeito sinérgico no retardo do crescimento tumoral. Os resultados apresentados nesta dissertação indicam que esses inibidores podem ser promissores para novas estratégias terapêuticas para o melanoma, inclusive quando em combinação com outros agentes, como dacarbazina e MEKi.