Efeitos de vesículas extracelulares derivadas de células-tronco pluripotentes induzidas em lesões geradas por fator de crescimento transformador beta em células mesangiais
Autor(a) principal: | |
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Data de Publicação: | 2021 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UNIFESP |
Texto Completo: | https://repositorio.unifesp.br/xmlui/handle/11600/62497 |
Resumo: | O fator de crescimento transformador beta (TGF-β) é um dos principais indutores de fibrose renal. Dentre suas ações destaca-se a indução da transdiferenciação miofibroblástica, tendo um papel importante na disfunção renal em várias condições fisiopatológicas, contribuindo para progressão da doença renal crônica. A inibição do sistema renina-angiotensina (SRA) é uma estratégia eficiente em reduzir os processos pró-fibróticos, no entanto, essa estratégia apenas retarda a progressão da doença, mas não reverte a fibrose estabelecida. Nesse contexto, é necessária a busca por novas terapias. A utilização de célulastronco pluripotentes induzidas (iPSC) tem sido considerada uma abordagem com grande potencial regenerativo tecidual, através de efeitos parácrinos pela secreção de biomoléculas liberadas no meio extracelular ou transportadas dentro de vesículas extracelulares (EVs) para células alvo. Portanto, a utilização de EVs derivadas de iPSC (EV-iPSC) pode ser uma abordagem terapêutica promissora com reduzidos efeitos colaterais em comparação às iPSC. Este estudo teve como objetivo avaliar o potencial efeito terapêutico de EVs derivadas de iPSC (EV-iPSC) em modelo in vitro, utilizando células mesangiais de camundongos (MMCs) estimuladas com TGF-β. EV-iPSC foram obtidas por ultracentrifugação diferencial do meio de cultura de iPSC e avaliadas por análise de rastreamento de nanopartículas (NTA). As EV-iPSC foram caracterizadas pela avaliação proteica de marcadores específicos. MMCs foram estimuladas com 5 ng/mL de TGF-β e tratadas ou não com EV-iPSC. Marcadores de inflamação, de fibrose e os componentes do SRA foram avaliados por RT-PCR, western blotting e imunofluorescência. Os resultados estão expressos como média ± erro padrão da média. A análise estatística foi feita através de análise de variância (ANOVA), seguida de teste de Tukey. Foi observada a expressão de marcadores positivos de EVs (CD9, CD63 e CD81) e negativo (calnexina), marcador de retículo endoplasmático. O tamanho médio das EV-iPSC foi de 151,6 nm. A análise quantitativa mostrou uma concentração média de 1,03x109 partículas/mL por 106 células. O estímulo com TGF-β aumentou a expressão de marcadores de fibrose (fibronectina, vimentina, α-SMA e colágeno do tipo I), moléculas relacionadas à inflamação (p50 e p65) e componentes do SRA (renina, angiotensinogênio e receptor AT1). Essas alterações foram atenuadas na presença de EV-iPSC. As EV-iPSC foram eficientes em reduzir os marcadores de fibrose, moléculas relacionadas à inflamação e componentes do SRA em MMCs estimuladas com TGF-β, podendo constituir uma ferramenta terapêutica em potencial na doença renal crônica. A utilização de EV-iPSC é uma terapia inovadora e de alta relevância translacional para modelos in vivo, abrindo novas perspectivas na área de nefrologia. |
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A inibição do sistema renina-angiotensina (SRA) é uma estratégia eficiente em reduzir os processos pró-fibróticos, no entanto, essa estratégia apenas retarda a progressão da doença, mas não reverte a fibrose estabelecida. Nesse contexto, é necessária a busca por novas terapias. A utilização de célulastronco pluripotentes induzidas (iPSC) tem sido considerada uma abordagem com grande potencial regenerativo tecidual, através de efeitos parácrinos pela secreção de biomoléculas liberadas no meio extracelular ou transportadas dentro de vesículas extracelulares (EVs) para células alvo. Portanto, a utilização de EVs derivadas de iPSC (EV-iPSC) pode ser uma abordagem terapêutica promissora com reduzidos efeitos colaterais em comparação às iPSC. Este estudo teve como objetivo avaliar o potencial efeito terapêutico de EVs derivadas de iPSC (EV-iPSC) em modelo in vitro, utilizando células mesangiais de camundongos (MMCs) estimuladas com TGF-β. EV-iPSC foram obtidas por ultracentrifugação diferencial do meio de cultura de iPSC e avaliadas por análise de rastreamento de nanopartículas (NTA). As EV-iPSC foram caracterizadas pela avaliação proteica de marcadores específicos. MMCs foram estimuladas com 5 ng/mL de TGF-β e tratadas ou não com EV-iPSC. Marcadores de inflamação, de fibrose e os componentes do SRA foram avaliados por RT-PCR, western blotting e imunofluorescência. Os resultados estão expressos como média ± erro padrão da média. A análise estatística foi feita através de análise de variância (ANOVA), seguida de teste de Tukey. Foi observada a expressão de marcadores positivos de EVs (CD9, CD63 e CD81) e negativo (calnexina), marcador de retículo endoplasmático. O tamanho médio das EV-iPSC foi de 151,6 nm. A análise quantitativa mostrou uma concentração média de 1,03x109 partículas/mL por 106 células. O estímulo com TGF-β aumentou a expressão de marcadores de fibrose (fibronectina, vimentina, α-SMA e colágeno do tipo I), moléculas relacionadas à inflamação (p50 e p65) e componentes do SRA (renina, angiotensinogênio e receptor AT1). Essas alterações foram atenuadas na presença de EV-iPSC. As EV-iPSC foram eficientes em reduzir os marcadores de fibrose, moléculas relacionadas à inflamação e componentes do SRA em MMCs estimuladas com TGF-β, podendo constituir uma ferramenta terapêutica em potencial na doença renal crônica. A utilização de EV-iPSC é uma terapia inovadora e de alta relevância translacional para modelos in vivo, abrindo novas perspectivas na área de nefrologia.Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)CNPq - 439042/2018-6FAPESP - 2015/23.345-980 f.porUniversidade Federal de São PauloFibrose renalTGF-βCélulas-tronco pluripotentes induzidasiPSCVesículas extracelularesCélula mesangialEfeitos de vesículas extracelulares derivadas de células-tronco pluripotentes induzidas em lesões geradas por fator de crescimento transformador beta em células mesangiaisEffect of extracellular vesicles derived from induced pluripotent stem cells on injury generated by transforming growth factor beta in mesangial cellsinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UNIFESPinstname:Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)instacron:UNIFESPEscola Paulista de Medicina (EPM)Medicina (Nefrologia)NefrologiaEfeitos de vesículas extracelulares derivadas de células-tronco pluripotentes induzidas em lesões geradas por fator de crescimento transformador beta em células mesangiaisORIGINALDissertação de Mestrado Bruno Aristides dos Santos Bronel - Versão Final.pdfDissertação de Mestrado Bruno Aristides dos Santos Bronel - Versão Final.pdfDissertação de Mestrado Bruno Aristides dos Santos Bronel - Versão Finalapplication/pdf1599377${dspace.ui.url}/bitstream/11600/62497/1/Disserta%c3%a7%c3%a3o%20de%20Mestrado%20Bruno%20Aristides%20dos%20Santos%20Bronel%20-%20Vers%c3%a3o%20Final.pdf29999cc865cb093f32c64686c996089aMD51open accessLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-85909${dspace.ui.url}/bitstream/11600/62497/2/license.txt3dd7107be96ee37de5cc464c6a81985bMD52open accessTEXTDissertação de Mestrado Bruno Aristides dos Santos Bronel - Versão Final.pdf.txtDissertação de Mestrado Bruno Aristides dos 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Effect of extracellular vesicles derived from induced pluripotent stem cells on injury generated by transforming growth factor beta in mesangial cells |
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Efeitos de vesículas extracelulares derivadas de células-tronco pluripotentes induzidas em lesões geradas por fator de crescimento transformador beta em células mesangiais |
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Efeitos de vesículas extracelulares derivadas de células-tronco pluripotentes induzidas em lesões geradas por fator de crescimento transformador beta em células mesangiais Bronel, Bruno Aristides dos Santos Fibrose renal TGF-β Células-tronco pluripotentes induzidas iPSC Vesículas extracelulares Célula mesangial |
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O fator de crescimento transformador beta (TGF-β) é um dos principais indutores de fibrose renal. Dentre suas ações destaca-se a indução da transdiferenciação miofibroblástica, tendo um papel importante na disfunção renal em várias condições fisiopatológicas, contribuindo para progressão da doença renal crônica. A inibição do sistema renina-angiotensina (SRA) é uma estratégia eficiente em reduzir os processos pró-fibróticos, no entanto, essa estratégia apenas retarda a progressão da doença, mas não reverte a fibrose estabelecida. Nesse contexto, é necessária a busca por novas terapias. A utilização de célulastronco pluripotentes induzidas (iPSC) tem sido considerada uma abordagem com grande potencial regenerativo tecidual, através de efeitos parácrinos pela secreção de biomoléculas liberadas no meio extracelular ou transportadas dentro de vesículas extracelulares (EVs) para células alvo. Portanto, a utilização de EVs derivadas de iPSC (EV-iPSC) pode ser uma abordagem terapêutica promissora com reduzidos efeitos colaterais em comparação às iPSC. Este estudo teve como objetivo avaliar o potencial efeito terapêutico de EVs derivadas de iPSC (EV-iPSC) em modelo in vitro, utilizando células mesangiais de camundongos (MMCs) estimuladas com TGF-β. EV-iPSC foram obtidas por ultracentrifugação diferencial do meio de cultura de iPSC e avaliadas por análise de rastreamento de nanopartículas (NTA). As EV-iPSC foram caracterizadas pela avaliação proteica de marcadores específicos. MMCs foram estimuladas com 5 ng/mL de TGF-β e tratadas ou não com EV-iPSC. Marcadores de inflamação, de fibrose e os componentes do SRA foram avaliados por RT-PCR, western blotting e imunofluorescência. Os resultados estão expressos como média ± erro padrão da média. A análise estatística foi feita através de análise de variância (ANOVA), seguida de teste de Tukey. Foi observada a expressão de marcadores positivos de EVs (CD9, CD63 e CD81) e negativo (calnexina), marcador de retículo endoplasmático. O tamanho médio das EV-iPSC foi de 151,6 nm. A análise quantitativa mostrou uma concentração média de 1,03x109 partículas/mL por 106 células. O estímulo com TGF-β aumentou a expressão de marcadores de fibrose (fibronectina, vimentina, α-SMA e colágeno do tipo I), moléculas relacionadas à inflamação (p50 e p65) e componentes do SRA (renina, angiotensinogênio e receptor AT1). Essas alterações foram atenuadas na presença de EV-iPSC. As EV-iPSC foram eficientes em reduzir os marcadores de fibrose, moléculas relacionadas à inflamação e componentes do SRA em MMCs estimuladas com TGF-β, podendo constituir uma ferramenta terapêutica em potencial na doença renal crônica. A utilização de EV-iPSC é uma terapia inovadora e de alta relevância translacional para modelos in vivo, abrindo novas perspectivas na área de nefrologia. |
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BRONEL, B. A.S. Efeito de vesículas extracelulares derivadas de células-tronco pluripotentes induzidas em lesões geradas por fator de crescimento transformador beta em células mensagiais. São Paulo, 2021. 80 f. Dissertação (Mestrado em Nefrologia) - Escola Paulista de Medicina (EPM), Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), São Paulo, 2021. |
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