Otimiza??o da produ??o da enzima anti-leuc?mica L-asparaginase por Penicillium sp.

• Autor(a) principal: Ardila, Jorge Andr?s Rueda
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFVJM
• Texto Completo: http://acervo.ufvjm.edu.br/jspui/handle/1/1563
• topic: Estat?stica multivari?vel; Atividade enzim?tica; Leucemia linfobl?stica aguda; Biotecnologia; Fungos filamentosos; Multivariable statistics; Enzymatic activity; Acute lymphoblastic leukemia; Biotechnology; Filamentous fungi; Estad?stica multivariable; Actividad enzim?tica; Biotecnolog?a; Leucemia linfobl?stica aguda; Fungos filamentosos

A enzima L-asparaginase ? atualmente utilizada na ind?stria de alimentos e na ind?stria farmac?utica devido ? facilidade de catalisar a rea??o de hidr?lise da L-asparagina em aspartato e am?nia. Esta propriedade tem aplica??o na ind?stria dos alimentos, pois evita a produ??o de compostos carcinog?nicos como as acrilamidas. Por outro lado, na ind?stria farmac?utica, esta rea??o enzim?tica det?m o crescimento de c?lulas leuc?micas devido ? falta de L-asparagina que estas c?lulas devem afrontar. Conforme as c?lulas leuc?micas t?m pouca ou nenhuma asparagina sintetase, as rotas metab?licas dependem exclusivamente da absor??o desse amino?cido do meio fisiol?gico. V?rias pesquisas foram feitas desde que a L-asparaginase mostrou a habilidade de reduzir alguns c?nceres na d?cada de 50. Estas pesquisas incluem a triagem de micro-organismos produtores, a otimiza??o de meios de cultura para melhorar a produ??o e a procura de uma metodologia que consiga purificar a enzima a partir do estrato bruto. Tais pesquisas se intensificaram recentemente no Brasil devido a uma crise de abastecimento gerada pela interrup??o da importa??o pelo fornecedor. A L-asparaginase ? um princ?pio ativo de alta demanda para tratar a leucemia linfobl?stica aguda e por isso deve ser produzida no Brasil. Este estudo foi realizado utilizando a linhagem Penicillium sp. T8.3 e teve como objetivo aprimorar a produ??o da enzima ajustando as condi??es de cultivo, usando glicerol e L-asparagina (como fontes de carbono e nitrog?nio, respectivamente) e pH como as tr?s vari?veis de entrada. Os experimentos foram desenvolvidos aplicando ferramentas da estat?stica multivari?vel como planejamento fatorial, desenho composto central para gerar um modelo matem?tico emp?rico. Foram analisadas a concentra??o de am?nio e a atividade enzim?tica produzida nos bioprocessos. A atividade enzim?tica foi determinada em rea??o conduzida a 37 ?C e pH 7,0, condi??es semelhantes ? do meio fisiol?gico. Todos os dados estat?sticos foram gerados com o programa Statistica 7.0 ?. Foi produzida uma atividade m?xima de 12,7 U por bioprocesso estacion?rio conduzido em meio ajustado com 15,5 g.L-1 de glicerol, 5,6 g.L-1 de L-asparagina e pH 4,8. Desse modo, o ajuste das condi??es de cultivo permitiu elevar a produ??o em mais de 30 vezes e alcan?ar uma atividade enzim?tica superior ? maioria dos relatos da literatura que tratam da produ??o da enzima f?ngica. O modelo estat?stico previu a produ??o enzim?tica com 77% de acerto, mostrando sua validade experimental e o potencial da linhagem T8.3 para a produ??o de L-asparaginase eucarionte.