Caracterização morfo-molecular de uma nova espécie do gênero Penicillium para a produção de L-asparaginase

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Andrade, Kellen Cruvinel Rodrigues
Data de Publicação: 2019
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UnB
Texto Completo: https://repositorio.unb.br/handle/10482/42247
Resumo: Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas, 2019.
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spelling Caracterização morfo-molecular de uma nova espécie do gênero Penicillium para a produção de L-asparaginaseMorpho-molecular characterization of a new species of the Penicillium genus for the production of L-asparaginaseL-AsparaginaseFungos filamentososLeucemia linfoblástica aguda (LLA)Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas, 2019.A enzima L-asparaginase representa grande importância no campo farmacêutico sendo utilizada no tratamento de neoplasias malignas, como para Leucemia Linfoblástica Aguda (LLA), devido à sua capacidade de hidrolisar a L-asparagina em L-aspartato e amônia. As preparações dessa enzima de uso clínico são derivadas de fonte bacteriana e seu uso está frequentemente associado a reações adversas graves. Assim, revela-se importante a busca por novas fontes de L-asparaginase. O objetivo desse trabalho foi analisar a produção de L-asparaginase fúngica por Penicillium sp. e caracterizá-lo morfo-molecularmente. A espécie em estudo (DCFS6) foi isolada do solo do Cerrado Centro-Oeste brasileiro. Em delineamento inicial foi empregado Placket-Burman Desing (PBD) para determinar a influência de 11 variáveis na produção de L-asparaginase, seguido por um delineamento Fatorial Fracionado (DFF) 28-4 e Composto Central Rotacional (DCCR). As variáveis consideradas foram L-asparagina, L-prolina, ureia, nitrato de sódio, extrato de levedura, sulfato de amônio, peptona, glicose, sacarose, extrato de malte e cloreto de potássio. A atividade de L-asparaginase foi determinada medindo a formação de β-hidroxamato aspártico. Os resultados obtidos do PBD apresentaram variação na atividade de L-asparaginase de 0,47 a 1,77 U/gcélulas, e identificou L-prolina como variável significativa (p < 0.1) com efeito positivo. No DFF a atividade enzimática variou de 1,10 a 2,36 U/gcélulas, e sulfato de amônio foi identificado como variável significativa com efeito positivo. Os resultados no delineamento final DCCR não permitiram obter um modelo matemático que gere uma superfície de resposta e determinar as concentrações otimizadas para o meio de cultivo. Na identificação da espécie, a cultura monohifal foi utilizada para a extração do DNA genômico e amplificação das regiões ITS (Ineternal Transcription Spacer) e RPB2 (RNA polymerase II second largest subunit). Análise filogenética por Inferência Bayesiana com combinação multigênica e a caracterização morfológica revelou o isolado em estudo com potencial de nova espécie, que será proposto seguindo as normas do Código Internacional de Nomenclatura para Algas, Fungos e Plantas.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES).The enzyme L-asparaginase is of great importance in the pharmaceutical field and is used in the treatment of malignant neoplasms, such as Acute Lymphoblastic Leukemia (ALL), due to its ability to hydrolyze L-asparagine in L-aspartate and ammonia. The preparations of this enzyme for clinical use are derived from a bacterial source and its use is often associated with serious adverse reactions. Therefore, the search for new sources of L-asparaginase is important. The objective of this work was to analyze the production of fungal L-asparaginase by Penicillium sp. and characterize it morpho-molecularly. The species under study (DCFS6) was isolated from the soil of the Brazilian Center-West Cerrado. In the initial design, Placket-Burman Desing (PBD) was used to determine the influence of 11 variables on the production of L-asparaginase, followed by a Factorial Fractional Design (DFF) 28-4 and Central Rotational Compound (DCCR). They were considered to be L-asparagine, L-proline, urea, sodium nitrate, yeast extract, ammonium sulfate, peptone, glucose, sucrose, malt extract and potassium chloride. L-asparaginase activity was determined by the formation of an aspartic β-hydroxamate. The results obtained from PBD showed a change in L-asparaginase activity from 0.47 to 1.77 U/gcell and identified L-proline as a significant variable (p <0.1) with a positive effect. In the DFF the enzymatic activity ranged from 1.10 to 2.36 U/gcell, and ammonium sulfate was identified as a significant variable with a positive effect.The results in the final design of the DCCR did not allow to obtain a mathematical model that indicates a surface of response and determination as the measures optimized for the culture medium. In the identification of the species, the monohifalic culture was used for extraction of the genetic DNA and amplification of the ITS regions (Ineternal Transverse Spacer) and RPB2 (second largest subunit of RNA polymerase II). Phylogenetic analysis by Bayesian Inference with multigenic combination and the morphological characterization revealed the isolate under study with potential of new species, in order to be presented following the norms of the International Code of Nomenclature for Algae, Fungi and Plants.Faculdade de Ciências da Saúde (FS)Departamento de Farmácia (FS FAR)Programa de Pós-Graduação em Ciências FarmacêuticasBatista, Pérola de Oliveira Magalhães DiasAndrade, Kellen Cruvinel Rodrigues2021-11-04T16:29:44Z2021-11-04T16:29:44Z2021-11-042019-05-08info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfANDRADE, Kellen Cruvinel Rodrigues. Caracterização morfo-molecular de uma nova espécie do gênero Penicillium para a produção de L-asparaginase. 2019. 105 f., il. Dissertação (Mestrado em Ciências Farmacêuticas)—Universidade de Brasília, Brasília, 2019.https://repositorio.unb.br/handle/10482/42247A concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNB2024-02-05T18:36:07Zoai:repositorio.unb.br:10482/42247Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestrepositorio@unb.bropendoar:2024-02-05T18:36:07Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
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