Subproteômica de trypanosoma cruzi : proteínas ácidas e fração enriquecida em organelas de alta densidade

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Guércio, Rafael Augusto Pontes
Data de Publicação: 2009
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UnB
Texto Completo: http://repositorio.unb.br/handle/10482/7424
Resumo: Tese (Doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2009.
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spelling Subproteômica de trypanosoma cruzi : proteínas ácidas e fração enriquecida em organelas de alta densidadeTripanossoma cruzi - transporte biológicoChagas, Doença deTese (Doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2009.O agente etiológico da Doença de Chagas é o parasito flagelado Trypanosoma cruzi (T. cruzi), o qual possui um ciclo de vida alternado entre vetores triatomíneos e hospedeiros mamíferos. A regulação da expressão gênica em T. cruzi dá-se ao nível pós-transcricional o que impossibilita a correlação direta entre os níveis de mRNA e proteínas e ao mesmo tempo torna atrativa a abordagem proteômica. O presente trabalho pretendeu contribuir com os estudos proteômicos do parasito seguindo duas vertentes, sendo a primeira a proteômica comparativa dos diferentes estágios de vida do T. cruzi com Ênfase nas proteínas Ácidas e a segunda a caracterização subproteômica de T. cruzi de uma fração enriquecida em organelas de alta densidade. Assim, foram padronizados perfis eletroforéticos bidimensionais em géis de poliacrilamida (2-DE) usando gradientes estreitos de pH nas faixas de pH 3-5,6NL; 5,3-6,5 para extratos totais das formas epimastigota, tripomastigota e amastigota. Os perfis bidimensionais das formas tripomastigota e amastigota mostraram-se bastante complexos com mais de 1.000 spots/gel e foram analisados computacionalmente a fim de detectarem-se spots proteicos estágio-específicos e diferencialmente expressos. Proteínas dos géis foram identificadas por técnicas de espectrometria de massa (MS). No que diz respeito ao subproteoma organelar, foi isolada da forma epimastigota uma fração de organelas de alta densidade. Análises por microscopia eletrônica de transmissão, e por imunotransferência, mostraram claramente um forte enriquecimento de núcleo. Os spots dos géis bidimensionais, em faixa ampla de pH 3-10 e nas faixas de pH 4-7 e pH 6-11, foram identificados por MS sendo encontradas proteínas nucleares, mitocondriais, flagelares e glicosomais e diversas proteínas hipotéticas.The flagellate parasite Trypanosoma cruzi (T. cruzi), the etiological agent of Chagas disease, possesses an alternate life cycle between triatomine vectors and mammalian hosts. The fact that T. cruzi gene expression regulation is posttranscriptional prevents the direct correlation between mRNA and protein levels and makes the proteomic approach very attractive. The present work aimed at contributing to the parasite proteomic studies following two different approaches, the comparative proteomics of T. cruzi life stages emphasizing the acidic proteins and the subproteome characterization of a T. cruzi fraction enriched in high density organelles. Thus, narrow pH range (pH 3-5.3 and pH 5.3-6.5) were optimized for protein extracts of epimastigote, tripomastigote and amastigote cells. The resulting tripomastigote and amastigote 2-DE profiles, that were rather complex, displaying more than 1,000 spots/gel, were computationally analyzed in order to determine stage-specific an differentially expressed spots.The 2-DE spots of interest were identified by mass spectrometry (MS) methods. Concerning the T. cruzi subproteome we isolated a fraction from epimastigote cells that was enriched in high density organelles including nuclei as confirmed by transmission electron microscopy, and immunoblotting. The spots of the 2-DE gels in the pH ranges 3- 10, 4-7 and 6-11 were identified by MS displaying nuclear, mitochondrial, flagellar, glycosomal as well as hypothetical proteins.Ricart, Carlos André OrnelasGuércio, Rafael Augusto Pontes2011-04-16T22:55:33Z2011-04-16T22:55:33Z2011-04-162009-11-20info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdfGUÉRCIO, Rafael Augusto Pontes. Subproteômica de trypanosoma cruzi: proteínas ácidas e fração enriquecida em organelas de alta densidade. 2009. xiv, 112 f., il. Tese (Doutorado em Biologia Molecular)-Universidade de Brasília, Brasília, 2009.http://repositorio.unb.br/handle/10482/7424info:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNB2023-07-08T00:00:57Zoai:repositorio.unb.br:10482/7424Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestrepositorio@unb.bropendoar:2023-07-08T00:00:57Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
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