Potencial leucemogênico do IL-7R mutante in vivo : In vivo leukemogenic potential of the mutant IL-7R

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Euzébio, Mayara Ferreira, 1993-
Data de Publicação: 2019
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/6399
Resumo: Orientador: José Andrés Yunes
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spelling Potencial leucemogênico do IL-7R mutante in vivo : In vivo leukemogenic potential of the mutant IL-7RIn vivo leukemogenic potential of the mutant IL-7RReceptores de Interleucina-7Leucemia linfóide agudaCamundongos transgênicosRecombinase CreReceptors, Interleukin-7Acute lymphoblastic leukemiaMice, TransgenicCre recombinaseOrientador: José Andrés YunesDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de BiologiaResumo: A leucemia linfoide aguda (LLA) é um câncer agressivo caracterizado pela alta produção e acúmulo de precursores linfoides imaturos, que proliferam e substituem as células saudáveis da medula óssea. Diversas mutações têm sido descritas em genes relacionados à regulação do desenvolvimento linfoide, ciclo celular, supressor tumoral e transdução de sinal em LLA. Estudos de nosso grupo de pesquisa encontraram mutações de ganho de função no gene IL-7R em 9% dos casos de LLA-T. Em sua maioria, as mutações resultam na introdução de uma cisteína que permite a formação de um homodímero entre duas cadeias IL-7Ralfa, por meio de ligações de disulfeto entre cisteinas. A homodimerização das cadeias confere ativação constitutiva das vias downstream ao receptor, JAK-STAT e PI3K/AKT, de maneira independente da IL7 e da cadeia ?c. Estudos in vitro, mostram que células transduzidas com o IL-7R mutante apresentam aumento de sobrevivência e proliferação na ausência de fatores de crescimento, e quando transplantadas em camundongos saudáveis resultam no desenvolvimento de tumores e infiltração de órgãos, apontando para o potencial leucemogênico do IL-7R mutante. O objetivo deste trabalho foi avaliar, portanto, se o IL-7R mutante, sob controle de seu próprio promotor, era capaz de desenvolver leucemia em camundongos. Nosso grupo de pesquisa desenvolveu uma linhagem de camundongos knockin, B6-IL7RCPT, que contém uma mutação específica in loco no gene IL-7Ralfa, inserida na forma de um éxon 6 invertido e flanqueado por sequencias de reconhecimento da recombinase Cre, LoxP e Lox511. A ativação da mutação está condicionada a desinversão do éxon, que só pode ocorrer através do sistema Flex-switch que é promovido pela ação da recombinase Cre. O cruzamento da linhagem B6-IL7RCPT com as linhagens Vav1-cre e CD2-icre com a linhagem permite a desinversão do éxon nas células tronco hematopoiéticas (HSCs), e nos progenitores linfoides comum (CLPs), respectivamente, obtendo uma prole de animais que expressam o receptor mutado em dois estágios distintos da hematopoese. Verificamos que o mutante IL-7Ralfa foi capaz de gerar desordem linfoproliferativa, com aumento da proporção de células B e diminuição de células T, bem como resultou em leucemia linfoide do tipo B em 35% ou 80% dos casos, a depender do estágio em que o IL-7R mutante era desinvertido, em HSC ou CLP, respectivamente. Os imunofenótipos das leucemias encontradas estavam entre os estágios Pré-B e Pró-B tardio e apresentavam expressão intermediária ou não expressavam CD45, assemelhando-se às LLA-B humanas. Também encontramos que a mutação oncogênica em IL7R? não resultou em desordens mieloproliferativas ou leucemias mieloides. Estes resultados mostram que o mutante IL-7R possui potencial leucemogênico quando expresso sob o próprio promotor, em modelo animal, e apontam que mutações no IL-7R podem ser mutações driverAbstract: Acute lymphoid leukemia (ALL) is an aggressive cancer characterized by high production and accumulation of immature lymphoid precursors, which proliferate and replace healthy bone marrow cells. Several mutations have been described in genes related to regulation of lymphoid development, cell cycle, tumor suppression and ALL signal transduction. Studies from our research group found gain of function mutations in the IL-7R gene in 9% of T-ALL cases. Most of the mutations result in the introduction of a cysteine that allows homodimer formation between two IL-7Ralpha chains by cysteine disulfide bonds. Chain homodimerization confers constitutive activation to the pathways downstream of the receptor, such as JAK-STAT and PI3K/AKT, independently of IL7 and the ?c chain. In vitro studies show that cells transduced with mutant IL-7R show increased survival and proliferation in the absence of growth factors, and when transplanted into healthy mice, these cells result in tumor development and organ infiltration, indicating the leukemogenic potential mutant IL-7R. Therefore, the aim of this study was to evaluate whether mutant IL-7R, under the control of its own promoter, was capable of causing the development of leukemia in mice. Our research group has developed a strain of knockin mice, B6-IL7RCPT, which contains a specific locus mutation in the IL-7Ralpha gene, inserted as an inverted exon 6 and flanked by Cre, LoxP and Lox511 recombinase recognition sequences. Activation of the mutation depends on exon inversion, which can only occur through the Flex-switch system, which is promoted by the action of Cre recombinase. Breeding of Vav1-cre and CD2-icre strains with the B6-IL7RCPT strain allowed the exon inversion in hematopoietic stem cells (HSCs) and the common lymphoid progenitors (CLPs), respectively, resulting in offspring that express the mutant receptor. We found that the IL-7Ralpha mutant was able to generate lymphoproliferative disorder, with prevalence increase in B-cells and decrease in T-cells, as well as B-type lymphoid leukemia in 35% or 80% of cases, depending on the stage (HSC or CLP, respectively) in that the mutant IL-7R was beginning to be transcribed. The leukemias found presented pre-B to late pro-B immunophenotypes and showed intermediate or no expression of CD45, resembling human ALL. We also found that the oncogenic mutation in IL7R? did not result in myeloproliferative disorders or myeloid leukemias. These results show that the IL-7R mutant has leukemogenic potential when expressed under its own promoter in an animal model, and also mutations in IL-7R may be driver mutationsMestradoGenética Animal e EvoluçãoMestra em Genética e Biologia MolecularFAPESP2016/077242; 2017/106532[s.n.]Yunes, José Andrés, 1967-Saad, Sara Teresinha OlallaMori, Marcelo AlvesUniversidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de BiologiaPrograma de Pós-Graduação em Genética e Biologia MolecularUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASEuzébio, Mayara Ferreira, 1993-20192019-09-10T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdf1 recurso online (86 p.) : il., digital, arquivo PDF.https://hdl.handle.net/20.500.12733/6399EUZÉBIO, Mayara Ferreira. Potencial leucemogênico do IL-7R mutante in vivo: In vivo leukemogenic potential of the mutant IL-7R. 2019. 1 recurso online (86 p.) Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/6399. Acesso em: 3 set. 2024.https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/1254805Requisitos do sistema: Software para leitura de arquivo em PDFporreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instacron:UNICAMPinfo:eu-repo/semantics/openAccess2022-11-11T15:36:15Zoai::1254805Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttp://repositorio.unicamp.br/oai/tese/oai.aspsbubd@unicamp.bropendoar:2022-11-11T15:36:15Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)false
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