Aplicação de métodos moleculares na identificação dos agentes causadores da doença de Chagas e leishmanioses em candidatos à doação de sangue com sorologia inconclusiva para doença de Chagas

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Ferreira, Juliana de Jesus Guimarães, 1989-
Data de Publicação: 2021
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/10990
Resumo: Orientadores: Sandra Cecília Botelho Costa, Gláucia Elisete Barbosa Marcon
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spelling Aplicação de métodos moleculares na identificação dos agentes causadores da doença de Chagas e leishmanioses em candidatos à doação de sangue com sorologia inconclusiva para doença de ChagasApplication of molecular methods for identification of agents causing Chagas disease and leishmaniasis in blood donation candidates showing inconclusive serology for Chagas diseaseDoença de ChagasLeishmanioseReação em cadeia da polimerase em tempo realChagas diseaseLeishmaniasisReal-time PCROrientadores: Sandra Cecília Botelho Costa, Gláucia Elisete Barbosa MarconTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências MédicasResumo: A doença de Chagas e as leishmanioses são consideradas doenças negligenciadas pois não há investimento em métodos de diagnóstico, controle e tratamento. A ocorrência de indivíduos assintomáticos dificulta ainda mais o manejo das doenças, uma vez que o processo de migração tem levado as infecções para áreas não-endêmicas e, portanto, permitindo a transmissão através de transfusão sanguínea e transplante de órgãos, pois nessas áreas não se aplica a triagem sorológica para estas doenças. No Brasil, a triagem sorológica para doença de Chagas é obrigatória, mas, para a leishmaniose não existe recomendação vigente, embora estudos tenham relatado a presença de anticorpos anti-Leishmania em candidatos à doação de sangue. Além disso, existe uma relativa parcela de resultados inconclusivos para doença de Chagas nos bancos de sangue, e, ainda, as técnicas sorológicas empregadas podem apresentar reação cruzada entre as duas doenças, devido às suas similaridades antigênicas. Dispondo de tecnologias de biologia molecular recentemente empregadas na tentativa de melhorar o diagnóstico destas doenças, o objetivo do presente trabalho foi utilizar a técnica de PCR em tempo real para identificar os parasitos em candidatos com resultados sorológicos inconclusivos ou positivos para doença de Chagas. Foram empregados também as técnicas de sorologia (ELISA e IFI), Nested-PCR e PCR convencional para auxiliar no diagnóstico, além da coleta de dados epidemiológicos. A análise incluiu 37 candidatos à doação de sangue, 18 indivíduos portadores da doença de Chagas e 11 indivíduos no grupo de controle negativo. No grupo de candidatos à doação de sangue (n=37), os testes para doença de Chagas foram positivos em 25,71% dos casos por ELISA, 34,29% por N-PCR e 24,32% por qPCR, com sensibilidade de 44,44% para N-PCR e 22,22% na qPCR. Houve apenas um caso com resultado positivo para a leishmaniose, detectado através de IFI, mas que também foi positivo para doença de Chagas pela qPCR. No grupo de portadores da doença de Chagas (n=18), a técnica de ELISA apresentou resultados positivos em 94,44% dos casos, a N-PCR 38,89% e a qPCR em 27,78%. A sensibilidade da N-PCR e qPCR neste grupo foi 35,29%. A padronização da qPCR apresentou eficiência de 0,86 para o alvo T. cruzi e 0,83 para o alvo Leishmania spp, com temperaturas de Melting de 81,86ºC ±0,45 e 81,28 ºC ±0,58, respectivamente, em reações repetidas por sete dias. Aplicando os métodos de diagnóstico descritos, foi possível identificar o T. cruzi em 61,76% dos casos de candidatos a doação com sorologia inconclusiva, esclarecendo estes casos. Reforça-se a necessidade do uso de duas metodologias para a triagem sorológica para doença de Chagas em bancos de sangue, além do uso de técnicas moleculares nos casos persistentemente inconclusivosAbstract: Chagas disease and leishmaniasis are considered neglected diseases because there are no investment in diagnostic methods, control, and treatment. The occurrence of asymptomatic subjects hampers the management of the disease, once the migration process has led the infections to non-endemic areas. Thus, this fact is allowing the transmission through blood transfusion and organs donation, because, in non-endemic areas, serological screening for both diseases are not performed. In Brazil, serological screening for Chagas disease is obligatory, but, for leishmaniasis, there are no current recommendations, notwithstanding researchers had been described the presence of anti-Leishmania antibodies in blood donation’ candidates. Moreover, there is a relative amount of inconclusive Chagas disease’ serology in blood banks and the employed serological tests may present cross-reactions between both diseases, due to his antigenic similarity. Affording of molecular biology techniques recently employed to attempt to improve the diagnostic of both diseases, the aim of the study was to apply the real-time PCR to identify the parasites in candidates showing inconclusive or positive tests for Chagas disease. Other methods were also employed to complement the diagnostic, such as ELISA and IIF as serological tests, PCR and N-PCR, in addition to epidemiological data. The analysis included 37 blood donation’ candidates, 18 subjects carriers of Chagas disease, and 11 subjects in the negative control group. In the blood donation’ candidates group (n=37), tests for Chagas disease were positive in 25.71% of cases through ELISA, 34.29 through N-PCR, and 24.32% through qPCR. N-PCR and qPCR showed a sensitivity of 44.44% and 22.22%, respectively. There is only one case of a positive result for leishmaniasis by IIF, but this sample also was positive for Chagas disease through qPCR. In the group of Chagas disease patients (n=18), the ELISA test showed 94.44% of positive results, the N-PCR in 38.89% of cases, and the qPCR in 27.78% of cases. Both N-PCR and qPCR showed a sensitivity of 35.29%. The qPCR standardization presented an efficiency of 0.86 and 0.83 for T. cruzi and Leishmania spp, respectively, with Melting temperatures of 81.86ºC ±0.45 and 81.28 ºC ±0.58, in reactions repeated for seven days. Applying the diagnostic methods described, it was possible to identify T. cruzi in 61.76% of inconclusive cases in blood donation’ candidates, elucidating these cases. It reinforces the necessity of using two methods for Chagas disease serological screening in blood banks, besides the use of molecular methods in persistent inconclusive casesDoutoradoClínica MédicaDoutora em CiênciasCAPES001[s.n.]Costa, Sandra Cecília Botelho, 1951-Marcon, Glaucia Elisete BarbosaBonon, Sandra Helena AlvesCoelho, Adriano CappellazzoUehara, Silvia Naomi de OliveiraUniversidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Ciências MédicasPrograma de Pós-Graduação em Clínica MédicaUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASFerreira, Juliana de Jesus Guimarães, 1989-20212021-12-15T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdf1 recurso online (101 p.) : il., digital, arquivo PDF.https://hdl.handle.net/20.500.12733/10990FERREIRA, Juliana de Jesus Guimarães. Aplicação de métodos moleculares na identificação dos agentes causadores da doença de Chagas e leishmanioses em candidatos à doação de sangue com sorologia inconclusiva para doença de Chagas. 2021. 1 recurso online (101 p.) Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/10990. Acesso em: 3 set. 2024.https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/1342607porreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instacron:UNICAMPinfo:eu-repo/semantics/openAccess2023-07-14T12:05:54Zoai::1342607Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttp://repositorio.unicamp.br/oai/tese/oai.aspsbubd@unicamp.bropendoar:2023-07-14T12:05:54Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)false
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