Desenvolvimento e aplicação da PCR em tempo real quantitativa para os vírus Epstein-Barr e Citomegalovírus em amostras de pacientes com glomerulopatias e transplantados renais pediátricos  

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Leon, Lucas Lopes, 1992-
Data de Publicação: 2018
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1635641
Resumo: Orientador: Sandra Helena Alves Bonon
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spelling Desenvolvimento e aplicação da PCR em tempo real quantitativa para os vírus Epstein-Barr e Citomegalovírus em amostras de pacientes com glomerulopatias e transplantados renais pediátricos  Development and application of the quantitative real time PCR for Epstein-Barr virus and Human Cytomegalovirus in samples of glomerulopathies and kidney transplant pediatric patients  Insuficiência renal crônicaCitomegalovírusHerpesvirus humano 4Reação em cadeia da polimeraseReação em cadeia da polimerase em tempo realChronic kidney diseaseCytomegalovirusEpstein-Barr virusPCRQuantitative real-time PCROrientador: Sandra Helena Alves BononDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências MédicasResumo: Infecções virais estão associadas diretamente a alta morbidade e mortalidade em pacientes imunodeprimidos, principalmente os transplantados e os que fazem uso de drogas imunossupressoras. Pacientes pediátricos, transplantados renais e com glomerulopatias são pacientes que estão predispostos a ocorrência de infecções oportunistas, rejeição aguda e dano ao enxerto por causa do uso de imunossupressores e estas complicações podem ser evitadas com a vigilância constante destas infecções. Nesse cenário, os pacientes acima mencionados encontram-se em alto risco de desenvolvimento de doenças relacionadas à infecção devido a alteração imunológica. O citomegalovírus humano (HCMV) é o patógeno viral mais comum associado a esse grupo de pacientes, embora o vírus Epstein-Barr (EBV) também tenha participação em prognósticos mais complicados. Neste estudo, verificamos a ocorrência da infecção ativa causada pelo EBV e HCMV em pacientes com glomerulopatias e transplantados renais através da carga viral determinada pela técnica da PCR quantitativa (qPCR) padronizada no laboratório. Para isso, utilizamos amostras de urina e plasma de 47 pacientes pediátricos, sendo 37 (79%) com glomerulopatias e 10 (21%) transplantados renais, analisadas durante uma mediana de 266 dias para a detecção dos vírus EBV e HCMV. Utilizamos na análise da detecção do genoma viral nas amostras a técnica da Nested-PCR e para a detecção e determinação da carga viral de ambos os vírus uma qPCR padronizada e otimizada nesse estudo e no total, foram analisadas 623 amostras. Os genes LMP-2A e UL83 para EBV e HCMV foram escolhidos, respectivamente, como as regiões conservadas dos vírus, para desenho dos primers e sonda e padronização da qPCR. O genoma do EBV foi detectado em 17/47 (36,2%) pacientes, sendo 5/47 em pacientes transplantados (10,5%) e 12/47 (25,5%) com glomerulopatias. O HCMV foi detectado em 28/47 (59,6%) pacientes, sendo 7/47 em pacientes transplantados (15%) e 21/47 (45%) com glomerulopatias. Considerando ambas as técnicas, 27 amostras foram positivas para o DNA do EBV e 104 foram positivas para HCMV. Obtivemos um limite de detecção de 83 cópias/mL para o EBV e 91 cópias/mL para HCMV, com uma incidência de 22 amostras para o EBV e 94 amostras para HCMV pela técnica da qPCR. A padronização de um método rápido e confiável de detecção da carga viral é uma tarefa difícil, mas tem grande valor na prevenção da ocorrência de doenças causadas por infecções, principalmente viraisAbstract: Viral infections are directly associated with high morbidity and mortality in immunocompromised patients, especially those transplanted and those under immunosuppressive treatments. Pediatric patients, renal transplant with glomerulopathies, are patients who are predisposed to opportunistic infections, acute rejection and graft damage due to the use of immunosuppressant, and these complications can be avoided with surveillance of these infections. In this scenario, pediatric patients are at high risk of developing diseases related to the infection due to immunological immaturity. Human cytomegalovirus (HCMV) is the most common viral pathogen associated with this group of patients, although the Epstein-Barr virus (EBV) also acts in more complicated prognoses. In this study, we verified the occurrence of active infection caused by EBV and HCMV in patients with glomerulopathies and renal transplants through viral load determined by the quantitative PCR technique (qPCR). For this, it was used urine and plasma samples from 47 pediatric patients, 37 (79%) with glomerulopathies and 10 (21%) renal transplants, analyzed during a median of 266 days for the detection of EBV and HCMV viruses. The analysis of viral genome detection in the samples was performed by the Nested-PCR technique and the detection and viral load determination for both viruses was performed by the qPCR, standardized and optimized in this study for this purpose. ln total, 623 samples were analyzed. The LMP-2A and UL83 genes which belong to EBV and HCMV were chosen, respectively, as conserved regions of the viruses, for primer and probe design and standardization of qPCR. The EBV genome was detected in 17/47 (36.2%) patients, 5/47 in transplanted patients (10.5%) and 12/47 (25.5%) with glomerulopathies. HCMV was detected in 28/47 (59.6%) patients, 7/47 in transplanted patients (15%) and 21/47 (45%) with glomerulopathies. Considering both techniques, 27 samples were EBV DNA positive and 104 were HCMV positive. The test standardized obtained a limit of detection of 83 copies/mL for EBV and 91 copies/mL for HCMV, with an incidence of 22 samples for EBV and 94 samples for HCMV by the qPCR technique. Standardization of a rapid and reliable method for detecting viral load is a difficult task, but it has great value in preventing the occurrence of diseases caused by infections, especially viralMestradoClínica MédicaMestre em CiênciasFAPESP2016/06596-0[s.n.]Bonon, Sandra Helena AlvesPalma, Lilian Monteiro PereiraFigueiredo, Mario Luis Garcia deUniversidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Ciências MédicasPrograma de Pós-Graduação em Clínica MédicaUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASLeon, Lucas Lopes, 1992-20182018-02-01T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdf1 recurso online (99 p.) : il., digital, arquivo PDF.https://hdl.handle.net/20.500.12733/1635641LEON, Lucas Lopes. Desenvolvimento e aplicação da PCR em tempo real quantitativa para os vírus Epstein-Barr e Citomegalovírus em amostras de pacientes com glomerulopatias e transplantados renais pediátricos   . 2018. 1 recurso online (99 p.) Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1635641. Acesso em: 3 set. 2024.https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/1081067Requisitos do sistema: Software para leitura de arquivo em PDFporreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instacron:UNICAMPinfo:eu-repo/semantics/openAccess2019-03-27T16:15:18Zoai::1081067Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttp://repositorio.unicamp.br/oai/tese/oai.aspsbubd@unicamp.bropendoar:2019-03-27T16:15:18Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)false
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