Caracterização bioquímica e farmacológica de duas fosfolipases A2 isoladas a partir da peçonha de Agkistrotron piscivorus leucostoma  

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Resende, Letícia Monteiro de, 1990-
Data de Publicação: 2016
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1633366
Resumo: Orientadores: Sérgio Marangoni, Saulo Luis da Silva
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spelling Caracterização bioquímica e farmacológica de duas fosfolipases A2 isoladas a partir da peçonha de Agkistrotron piscivorus leucostoma  Biochemical and pharmacological characterization of phospholipases A2 Apl-TX-I (basic) an APL-TX-II (acidic) isolated from Agkistrodon piscivorus leucostoma venomFosfolipases A2Venenos de serpentesAgkistrodon piscivorusPhospholipases A2Snake venomsAgkistrodon piscivorusOrientadores: Sérgio Marangoni, Saulo Luis da SilvaTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de BiologiaResumo: As peçonhas de animais são secreções extraordinariamente complexas produzidas em uma glândula específica e que são naturalmente adaptados pela seleção natural para atuar em sistemas vitais da presa a fim de imobilizar e digerir a mesma. As fosfolipases A2 (PLA2s) são as principais e mais estudadas enzimas dos venenos de serpentes, sendo extremamente tóxicas e apresentando uma série de efeitos farmacológicos característicos dos envenenamentos. Neste trabalho foram isoladas e caracterizadas duas fosfolipases A2, uma básica (APL-TX-I) e outra ácida (APL-TX-II), a partir do veneno da serpente Agkistrodon piscivorus leucostoma, a fim de melhor compreender as características bioquímicas e os papéis das PLA2s em acidentes por animais peçonhentos. Ambas as fosfolipases foram purificadas por meio de duas etapas cromatográficas, exclusão molecular em coluna Superdex-75 e cromatografia líquida de alta eficiência fase reversa (HPLC-FR) em coluna C-18. O grau de pureza das duas proteínas foi confirmado por uma recromatografia em coluna C-18, gel SDS-PAGE e espectrometria de massas. Tanto APL-TX-I quanto APL-TX-II apresentam-se como monoméricas e possuem massa molecular de 14003,2256 Da e 13885,7930 Da, respectivamente. O ponto isoelétrico calculado para APL-TX-I é 7,93, o que a caracteriza como uma proteína básica e para APL-TX-II é de 5,12, caracterizando-se como uma proteína ácida. APL-TX-I e APL-TX-II possuem estruturas primárias bastante similares a outras fosfolipases já caracterizadas apresentando domínios altamente conservados característicos de fosfolipases de tipo A2 sendo ambas definidas como D49. APL-TX-II apresenta alta atividade enzimática sobre o substrato sintético não micelar ácido 4-nitro-3-octanoiloxibenzóico (NOBA), enquanto APL-TX-I apresenta atividade moderada sobre o mesmo substrato. APL-TX-II mostrou-se altamente neurotóxica em preparações musculares biventer cervicis de pintainhos, provocando bloqueio da contração muscular. Em contrapartida, APL-TX-I provocou atividade miotóxica baixa e atividade edematogênica moderada. Os resultados obtidos neste trabalho demonstram que ambas as proteínas estudadas desempenham tem um papel importante na indução de efeitos tóxicos do envenenamento por Agkistrodon piscivorus leucostoma. Essas informações são relevantes para o desenvolvimento de novas ferramentas moleculares e para a melhor compreensão dos mecanismos tóxicos e farmacológicos das fosfolipases A2 ácidas e básicas provenientes de venenos de serpentes, buscando as melhores formas de tratamento para acidentes com estes animaisAbstract: Animal venoms are extraordinarily complex secretions produced in a specific gland and that are naturally adapted by natural selection to act on vital systems of prey in order to immobilize and digest it. Phospholipases A2 (PLA2) are the first and most studied enzymes from snake venoms. They are extremely toxic and show a series of characteristic pharmacological effects of poisonings. In this work two phospholipases A2 were isolated from the venom of Agkistrodon piscivorus leucostoma and were biochemical and pharmacologically characterized, in order to better understand the biochemical characteristics and roles of PLA2 in envenomations. Both phospholipases were purified by two chromatographic steps. First we used Superdex-75 column in the size exclusion and a C18 column in reverse phase high-performance liquid chromatography steps. The purity of proteins was confirmed by another C-18 reversed phase chromatography, SDS-PAGE gels and mass spectrometry. Both APL-TX-I and APL-TX-II present as monomeric and have a molecular weight of 14003,2256 Da and 13885,7930 Da, respectively. The theoretical isoelectric value APL-TX-I is 7.93, which characterizes it as a basic protein and for APL-TX-II is 5.12, characterized as acidic protein. APL-TX-I and APL-TX-II have very similar primary structures with other phospholipases characterized by presence of conserved domains characteristic of phospholipase A2. Thus, they were classified as D49. APL-TX-II has high activity on the non micellar synthetic substrate 4-nitro-3-octanoyloxybenzoic acid (NOBA) while APL-TX-I shows moderate activity on the same substrate. Enzyme APL-TX-II was highly neurotoxic in muscle preparations biventer cervicis chicks, leading to blockage of muscle contraction. In contrast, APL-TX-I caused low myotoxic activity and moderate edema activity. The results of this study show that both proteins studied play an important role in inducing toxic effects of poisoning Agkistrodon piscivorus leucostoma. This information is relevant to the development of new molecular tools and a better understanding of toxic and pharmacological mechanisms of acidic and basic phospholipase A2 from snake venomsDoutoradoBioquímicaDoutora em Biologia Funcional e MolecularCAPES[s.n.]Marangoni, Sergio, 1951-Silva, Saulo Luís da, 1968-Martins-de-Souza, DanielSouza, Ana Carolina Santos deWinck, Flavia VischiCassoli, Juliana SilvaUniversidade Estadual de Campinas. Instituto de BiologiaPrograma de Pós-Graduação em Biologia Funcional e MolecularUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASResende, Letícia Monteiro de, 1990-20162016-11-28T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdf1 recurso online (112 p.) : il., digital, arquivo PDF.https://hdl.handle.net/20.500.12733/1633366RESENDE, Letícia Monteiro de. Caracterização bioquímica e farmacológica de duas fosfolipases A2 isoladas a partir da peçonha de Agkistrotron piscivorus leucostoma   . 2016. 1 recurso online (112 p.) Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1633366. 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