Estudo da expressão gênica em aves de linhagens comerciais (Gallus gallus domesticus) experimentalmente infectadas por Salmonella Enteritidis: Padronização da técnica de RT-qPCR
Autor(a) principal: | |
---|---|
Data de Publicação: | 2023 |
Tipo de documento: | Trabalho de conclusão de curso |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UNESP |
Texto Completo: | http://hdl.handle.net/11449/244768 |
Resumo: | A técnica de qPCR, quantifica em tempo real baixas concentrações de ácidos nucleicos, por meio de fluorescência, presentes em amostras biológicas obtidas de diversas fontes. Trata-se de uma técnica padrão-ouro em pesquisas de expressão gênica e em diagnósticos laboratoriais. O presente trabalho tem como intuito padronizar a técnica de RT-qPCR, responsável pela quantificação da expressão gênica. Foram utilizadas duas estirpes (mutante e selvagem) de Salmonella Enteritidis em aves de um dia de vida que, posteriormente, foram eutanasiadas para a colheita de baço e tonsila cecal. Foi feita a extração de RNA dos tecidos, seguido de transcrição reversa para a execução das reações de RT-qPCR. A curva de normalização foi realizada para quatro genes de referência e, foi selecionado o gene 28S como o mais estável. Alguns detalhes como outros métodos de assepsia dos materiais para a extração de RNA e no momento do preparo das reações demonstraram pequenas diferenças e, consequentemente, contribuíram no êxito da padronização. |
id |
UNSP_4084a8728823bd0ba576fcbfdfd88977 |
---|---|
oai_identifier_str |
oai:repositorio.unesp.br:11449/244768 |
network_acronym_str |
UNSP |
network_name_str |
Repositório Institucional da UNESP |
repository_id_str |
2946 |
spelling |
Estudo da expressão gênica em aves de linhagens comerciais (Gallus gallus domesticus) experimentalmente infectadas por Salmonella Enteritidis: Padronização da técnica de RT-qPCRStudy of gene expression in different chickens lineages (Gallus gallus domesticus) experimentally infected with Salmonella Enteritidis: Standardization of the RT-qPCR techniquePCR em tempo realRna (Nucleic acid)Gene Expression RegulationA técnica de qPCR, quantifica em tempo real baixas concentrações de ácidos nucleicos, por meio de fluorescência, presentes em amostras biológicas obtidas de diversas fontes. Trata-se de uma técnica padrão-ouro em pesquisas de expressão gênica e em diagnósticos laboratoriais. O presente trabalho tem como intuito padronizar a técnica de RT-qPCR, responsável pela quantificação da expressão gênica. Foram utilizadas duas estirpes (mutante e selvagem) de Salmonella Enteritidis em aves de um dia de vida que, posteriormente, foram eutanasiadas para a colheita de baço e tonsila cecal. Foi feita a extração de RNA dos tecidos, seguido de transcrição reversa para a execução das reações de RT-qPCR. A curva de normalização foi realizada para quatro genes de referência e, foi selecionado o gene 28S como o mais estável. Alguns detalhes como outros métodos de assepsia dos materiais para a extração de RNA e no momento do preparo das reações demonstraram pequenas diferenças e, consequentemente, contribuíram no êxito da padronização.The qPCR technique quantifies extremely low amounts of nucleic acids in real-time, through fluorescence, present in biological samples obtained from different sources. It is considered a gold standard technique in gene expression research and laboratory diagnostics. The objective of the current work was to standardize the RT-qPCR technique, responsible for the quantification of gene expression. Two strains (mutant and wild) of Salmonella Enteritidis were used in one-day-old chicken, which was later euthanized for spleen and cecal tonsil collection. RNA extraction of tissues and reverse transcription were performed to the RT-qPCR reactions. A normalization curve was performed for four reference genes, and 28S gene was selected as the most stable. Some details, such as other methods of asepsis of the materials for RNA extraction and the time of preparation of the reactions, made minor differences that contributed to the success of the standardization.Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)FAPESP: 2018/03189-0Universidade Estadual Paulista (Unesp)Berchieri Junior, AngeloUniversidade Estadual Paulista (Unesp)Saraiva, Mauro de Mesquista SouzaLima, Tulio Spina de2023-07-26T13:06:28Z2023-07-26T13:06:28Z2023-06-23info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/11449/244768porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UNESPinstname:Universidade Estadual Paulista (UNESP)instacron:UNESP2023-12-21T06:21:31Zoai:repositorio.unesp.br:11449/244768Repositório InstitucionalPUBhttp://repositorio.unesp.br/oai/requestopendoar:29462024-08-05T20:54:59.516940Repositório Institucional da UNESP - Universidade Estadual Paulista (UNESP)false |
dc.title.none.fl_str_mv |
Estudo da expressão gênica em aves de linhagens comerciais (Gallus gallus domesticus) experimentalmente infectadas por Salmonella Enteritidis: Padronização da técnica de RT-qPCR Study of gene expression in different chickens lineages (Gallus gallus domesticus) experimentally infected with Salmonella Enteritidis: Standardization of the RT-qPCR technique |
title |
Estudo da expressão gênica em aves de linhagens comerciais (Gallus gallus domesticus) experimentalmente infectadas por Salmonella Enteritidis: Padronização da técnica de RT-qPCR |
spellingShingle |
Estudo da expressão gênica em aves de linhagens comerciais (Gallus gallus domesticus) experimentalmente infectadas por Salmonella Enteritidis: Padronização da técnica de RT-qPCR Lima, Tulio Spina de PCR em tempo real Rna (Nucleic acid) Gene Expression Regulation |
title_short |
Estudo da expressão gênica em aves de linhagens comerciais (Gallus gallus domesticus) experimentalmente infectadas por Salmonella Enteritidis: Padronização da técnica de RT-qPCR |
title_full |
Estudo da expressão gênica em aves de linhagens comerciais (Gallus gallus domesticus) experimentalmente infectadas por Salmonella Enteritidis: Padronização da técnica de RT-qPCR |
title_fullStr |
Estudo da expressão gênica em aves de linhagens comerciais (Gallus gallus domesticus) experimentalmente infectadas por Salmonella Enteritidis: Padronização da técnica de RT-qPCR |
title_full_unstemmed |
Estudo da expressão gênica em aves de linhagens comerciais (Gallus gallus domesticus) experimentalmente infectadas por Salmonella Enteritidis: Padronização da técnica de RT-qPCR |
title_sort |
Estudo da expressão gênica em aves de linhagens comerciais (Gallus gallus domesticus) experimentalmente infectadas por Salmonella Enteritidis: Padronização da técnica de RT-qPCR |
author |
Lima, Tulio Spina de |
author_facet |
Lima, Tulio Spina de |
author_role |
author |
dc.contributor.none.fl_str_mv |
Berchieri Junior, Angelo Universidade Estadual Paulista (Unesp) Saraiva, Mauro de Mesquista Souza |
dc.contributor.author.fl_str_mv |
Lima, Tulio Spina de |
dc.subject.por.fl_str_mv |
PCR em tempo real Rna (Nucleic acid) Gene Expression Regulation |
topic |
PCR em tempo real Rna (Nucleic acid) Gene Expression Regulation |
description |
A técnica de qPCR, quantifica em tempo real baixas concentrações de ácidos nucleicos, por meio de fluorescência, presentes em amostras biológicas obtidas de diversas fontes. Trata-se de uma técnica padrão-ouro em pesquisas de expressão gênica e em diagnósticos laboratoriais. O presente trabalho tem como intuito padronizar a técnica de RT-qPCR, responsável pela quantificação da expressão gênica. Foram utilizadas duas estirpes (mutante e selvagem) de Salmonella Enteritidis em aves de um dia de vida que, posteriormente, foram eutanasiadas para a colheita de baço e tonsila cecal. Foi feita a extração de RNA dos tecidos, seguido de transcrição reversa para a execução das reações de RT-qPCR. A curva de normalização foi realizada para quatro genes de referência e, foi selecionado o gene 28S como o mais estável. Alguns detalhes como outros métodos de assepsia dos materiais para a extração de RNA e no momento do preparo das reações demonstraram pequenas diferenças e, consequentemente, contribuíram no êxito da padronização. |
publishDate |
2023 |
dc.date.none.fl_str_mv |
2023-07-26T13:06:28Z 2023-07-26T13:06:28Z 2023-06-23 |
dc.type.status.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/publishedVersion |
dc.type.driver.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/bachelorThesis |
format |
bachelorThesis |
status_str |
publishedVersion |
dc.identifier.uri.fl_str_mv |
http://hdl.handle.net/11449/244768 |
url |
http://hdl.handle.net/11449/244768 |
dc.language.iso.fl_str_mv |
por |
language |
por |
dc.rights.driver.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/openAccess |
eu_rights_str_mv |
openAccess |
dc.format.none.fl_str_mv |
application/pdf |
dc.publisher.none.fl_str_mv |
Universidade Estadual Paulista (Unesp) |
publisher.none.fl_str_mv |
Universidade Estadual Paulista (Unesp) |
dc.source.none.fl_str_mv |
reponame:Repositório Institucional da UNESP instname:Universidade Estadual Paulista (UNESP) instacron:UNESP |
instname_str |
Universidade Estadual Paulista (UNESP) |
instacron_str |
UNESP |
institution |
UNESP |
reponame_str |
Repositório Institucional da UNESP |
collection |
Repositório Institucional da UNESP |
repository.name.fl_str_mv |
Repositório Institucional da UNESP - Universidade Estadual Paulista (UNESP) |
repository.mail.fl_str_mv |
|
_version_ |
1808129262653276160 |