Estudo da expressão gênica em aves de linhagens comerciais (Gallus gallus domesticus) experimentalmente infectadas por Salmonella Enteritidis: Padronização da técnica de RT-qPCR

• Autor(a) principal: Lima, Tulio Spina de
• Data de Publicação: 2023
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/11449/244768
• topic: PCR em tempo real; Rna (Nucleic acid); Gene Expression Regulation

A técnica de qPCR, quantifica em tempo real baixas concentrações de ácidos nucleicos, por meio de fluorescência, presentes em amostras biológicas obtidas de diversas fontes. Trata-se de uma técnica padrão-ouro em pesquisas de expressão gênica e em diagnósticos laboratoriais. O presente trabalho tem como intuito padronizar a técnica de RT-qPCR, responsável pela quantificação da expressão gênica. Foram utilizadas duas estirpes (mutante e selvagem) de Salmonella Enteritidis em aves de um dia de vida que, posteriormente, foram eutanasiadas para a colheita de baço e tonsila cecal. Foi feita a extração de RNA dos tecidos, seguido de transcrição reversa para a execução das reações de RT-qPCR. A curva de normalização foi realizada para quatro genes de referência e, foi selecionado o gene 28S como o mais estável. Alguns detalhes como outros métodos de assepsia dos materiais para a extração de RNA e no momento do preparo das reações demonstraram pequenas diferenças e, consequentemente, contribuíram no êxito da padronização.