Avaliação da estrutura e atividade biológica do mastoparano Polybia-MPII marcado com fluoróforo e visualização de sua ação em mastócitos através da microscopia de fluorescência
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Data de Publicação: | 2017 |
Tipo de documento: | Trabalho de conclusão de curso |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UNESP |
Texto Completo: | http://hdl.handle.net/11449/156171 http://www.athena.biblioteca.unesp.br/exlibris/bd/capelo/2018-02-22/000891354.pdf |
Resumo: | Os venenos de vespas têm importantes ações farmacológicas e imunológicas durante os envenenamentos (HABERMANN, 1972). A liberação de histamina a partir da desgranulação dos mastócitos pode causar ativação de vários processos inflamatórios. As toxinas peptídicas destes venenos podem ainda causar lise de diferentes tipos celulares, quimiotaxia de macrófagos e leucócitos. Dentre os peptídeos mais comuns aos venenos de vespas sociais estão os mastoparanos, conhecidos por interagirem com membranas celulares, causando diferentes ações farmacológicas como, por exemplo, o Polybia-MPII isolado do veneno de Polybia paulista (DE SOUZA, 2005). Desta forma, a proposta deste trabalho foi de identificar possíveis locais de atuação deste peptídeo no interior dos mastócitos, através de fluorescência. A preparação do peptídeo para acoplamento de um grupo fluoróforo exigiu a cisteinilação do mesmo, e a caracterização do peptídeo modificado. Para obtenção dos peptídeos foi utilizada a técnica de síntese automática de peptídeos em fase sólida, com posterior purificação em cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC), e análise em espectrometria de massas para verificação da pureza, para assim serem realizados os ensaios de antibiose e desgranulação de mastócito. Além disso, foram realizadas análises de dicroísmo circular para verificar as alterações estruturais causados pela modificação na estrutura do Polybia-MPII, e experimento de microscopia de fluorescência, utilizando-se o peptídeo marcado com fluoróforo, em mastócitos do peritônio de camundongos Wistar fêmea. As formas sintéticas dos peptídeos Polybia-MPII e cisteinil-Polybia-MPII (C-Polybia-MPII) foram purificados sob condições isocráticas, utilizando-se acetonitrila 45% (v/v) e 42 % (v/v), respectivamente, como fase móvel. Posteriormente, as massas moleculares de ambos os peptídeos e o grau... |
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Avaliação da estrutura e atividade biológica do mastoparano Polybia-MPII marcado com fluoróforo e visualização de sua ação em mastócitos através da microscopia de fluorescênciaVespaVespa - VenenoMastócitosMicroscopia de fluorescenciaPeptídeosPeptídeos - SínteseDicroismo circularOs venenos de vespas têm importantes ações farmacológicas e imunológicas durante os envenenamentos (HABERMANN, 1972). A liberação de histamina a partir da desgranulação dos mastócitos pode causar ativação de vários processos inflamatórios. As toxinas peptídicas destes venenos podem ainda causar lise de diferentes tipos celulares, quimiotaxia de macrófagos e leucócitos. Dentre os peptídeos mais comuns aos venenos de vespas sociais estão os mastoparanos, conhecidos por interagirem com membranas celulares, causando diferentes ações farmacológicas como, por exemplo, o Polybia-MPII isolado do veneno de Polybia paulista (DE SOUZA, 2005). Desta forma, a proposta deste trabalho foi de identificar possíveis locais de atuação deste peptídeo no interior dos mastócitos, através de fluorescência. A preparação do peptídeo para acoplamento de um grupo fluoróforo exigiu a cisteinilação do mesmo, e a caracterização do peptídeo modificado. Para obtenção dos peptídeos foi utilizada a técnica de síntese automática de peptídeos em fase sólida, com posterior purificação em cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC), e análise em espectrometria de massas para verificação da pureza, para assim serem realizados os ensaios de antibiose e desgranulação de mastócito. Além disso, foram realizadas análises de dicroísmo circular para verificar as alterações estruturais causados pela modificação na estrutura do Polybia-MPII, e experimento de microscopia de fluorescência, utilizando-se o peptídeo marcado com fluoróforo, em mastócitos do peritônio de camundongos Wistar fêmea. As formas sintéticas dos peptídeos Polybia-MPII e cisteinil-Polybia-MPII (C-Polybia-MPII) foram purificados sob condições isocráticas, utilizando-se acetonitrila 45% (v/v) e 42 % (v/v), respectivamente, como fase móvel. Posteriormente, as massas moleculares de ambos os peptídeos e o grau...Universidade Estadual Paulista (Unesp)Palma, Mario Sergio [UNESP]Souza, Bibiana Monson de [UNESP]Universidade Estadual Paulista (Unesp)Sato, Kenny Umino [UNESP]2018-09-19T17:26:11Z2018-09-19T17:26:11Z2017info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/bachelorThesis39 f.application/pdfSATO, Kenny Umino. Avaliação da estrutura e atividade biológica do mastoparano Polybia-MPII marcado com fluoróforo e visualização de sua ação em mastócitos através da microscopia de fluorescência. 2017. 39 f. Trabalho de conclusão de curso (bacharelado e licenciatura - Ciências Biológicas) - Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho, Instituto de Biociências (Campus de Rio Claro), 2017.http://hdl.handle.net/11449/156171000891354http://www.athena.biblioteca.unesp.br/exlibris/bd/capelo/2018-02-22/000891354.pdf2901888624506535Alephreponame:Repositório Institucional da UNESPinstname:Universidade Estadual Paulista (UNESP)instacron:UNESPporinfo:eu-repo/semantics/openAccess2023-11-15T06:14:44Zoai:repositorio.unesp.br:11449/156171Repositório InstitucionalPUBhttp://repositorio.unesp.br/oai/requestopendoar:29462024-08-05T17:45:28.241013Repositório Institucional da UNESP - Universidade Estadual Paulista (UNESP)false |
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Os venenos de vespas têm importantes ações farmacológicas e imunológicas durante os envenenamentos (HABERMANN, 1972). A liberação de histamina a partir da desgranulação dos mastócitos pode causar ativação de vários processos inflamatórios. As toxinas peptídicas destes venenos podem ainda causar lise de diferentes tipos celulares, quimiotaxia de macrófagos e leucócitos. Dentre os peptídeos mais comuns aos venenos de vespas sociais estão os mastoparanos, conhecidos por interagirem com membranas celulares, causando diferentes ações farmacológicas como, por exemplo, o Polybia-MPII isolado do veneno de Polybia paulista (DE SOUZA, 2005). Desta forma, a proposta deste trabalho foi de identificar possíveis locais de atuação deste peptídeo no interior dos mastócitos, através de fluorescência. A preparação do peptídeo para acoplamento de um grupo fluoróforo exigiu a cisteinilação do mesmo, e a caracterização do peptídeo modificado. Para obtenção dos peptídeos foi utilizada a técnica de síntese automática de peptídeos em fase sólida, com posterior purificação em cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC), e análise em espectrometria de massas para verificação da pureza, para assim serem realizados os ensaios de antibiose e desgranulação de mastócito. Além disso, foram realizadas análises de dicroísmo circular para verificar as alterações estruturais causados pela modificação na estrutura do Polybia-MPII, e experimento de microscopia de fluorescência, utilizando-se o peptídeo marcado com fluoróforo, em mastócitos do peritônio de camundongos Wistar fêmea. As formas sintéticas dos peptídeos Polybia-MPII e cisteinil-Polybia-MPII (C-Polybia-MPII) foram purificados sob condições isocráticas, utilizando-se acetonitrila 45% (v/v) e 42 % (v/v), respectivamente, como fase móvel. Posteriormente, as massas moleculares de ambos os peptídeos e o grau... |
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