Sexagem de embriões bovinos fecundados in vitro pela técnica de PCR multiplex

• Autor(a) principal: LUZ, Marcelo Rezende [UNESP]
• Data de Publicação: 2000
• Outros Autores: WATANABE, Yeda Fumie, FERRO, Jesus Aparecido [UNESP], FERRO, Maria Inês T. [UNESP], MAURO, Sônia Marli Singaretti de [UNESP], HOSSEPIAN DE LIMA, Vera Fernanda Martins [UNESP], FRANCESCHINI, Paulo Henrique [UNESP]
• Tipo de documento: Artigo
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
• Texto Completo: http://dx.doi.org/10.1590/S1413-95962000000600006; http://hdl.handle.net/11449/2586
• topic: Sexagem; Embrião; Bovino; PCR; Sexing; Embryo; Bovine; PCR

Neste trabalho, a técnica de PCR (polymerase chain reaction) foi utilizada para a sexagem de 92 embriões bovinos fertilizados in vitro. Os embriões originaram-se de fertilização in vitro de oócitos aspirados de ovários de fêmeas bovinas, provenientes de abatedouros comerciais. Os oócitos foram maturados, fertilizados e cultivados até o estádio de blastocisto. Os embriões foram lavados em solução de PBS, transferidos para tubos de polipropileno contendo água ultrapura, e imediatamente congelados a -196ºC. Os embriões foram descongelados sobre isopor contendo gelo picado e tratados com proteinase K. Para a reação de PCR, utilizaram-se alíquotas de 34 µl de cada tudo, onde foram acrescidos dois pares de primers, seqüência BC1.2 e seqüência satélite 1.715, desoxinucleotídeos, MgCl2, tampão PCR 10X, TaqDNA polimerase e água, em um volume final de 50 µl. As amostras foram amplificadas e a eletroforese realizada em gel de poliacrilamida a 8%. Os géis foram corados com solução de brometo de etídio e analisados em transiluminador de luz ultravioleta. Um índice de 93,47% de amplificação foi atingido, com 41 embriões (47,67%) machos e 45 (52,32%) embriões fêmeas. O uso de gel de poliacrilamida a 8% foi eficaz na separação de fragmentos de DNA muito próximos.