Isolamento e caracterização de proteínas foliares da Ilex paraguariensis St. Hil. (erva mate)
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Data de Publicação: | 2015 |
Tipo de documento: | Dissertação |
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Título da fonte: | Repositório Institucional da UNISINOS (RBDU Repositório Digital da Biblioteca da Unisinos) |
Texto Completo: | http://www.repositorio.jesuita.org.br/handle/UNISINOS/3897 |
Resumo: | A Ilex paraguariensis é uma planta da família Aquifoliaceae, nativa da região subtropical da América do Sul e consumida e produzida em larga escala nas regiões meridionais do Brasil. O interesse na planta vem aumentando a medida que estudos são desenvolvidos mostrando diversos benefícios da Ilex paraguariensis. A maioria destas pesquisas associa a atividade antioxidante da planta à sua composição fenólica. Entretanto, como estudos com outras fontes vegetais também relacionam as propriedades antioxidantes a compostos bioativos proteicos é importante a avaliação e caracterização das proteínas foliares de Ilex paraguariensis, uma vez que compostos bioativos naturais podem ser utilizados para a saúde como complementos ou ingredientes funcionais. Nesse contexto, o objetivo do estudo foi caracterizar as proteínas foliares de Ilex paraguariensis. Para tanto, folhas da planta passaram por diferentes processos de extração e fracionamento. Inicialmente, o material vegetal foi homogeneizado com Tampão Tris HCl 50 mM, pH 8, EDTA 1 mM, DTT 0,5 mM, 5% de Glicerol e 0,1% de Triton X100, filtrado e centrifugado; posteriormente precipitado com diferentes concentrações de sal e ainda dialisado e separado por membrana de ultrafiltração. As amostras obtidas em cada etapa deste processo foram avaliadas quanto à quantidade de proteínas, polifenois totais, caracterização de perfil proteico (SDS-PAGE) e atividade antioxidante. Em relação a caracterização proteica, a concentração foliar obtida foi de 5,29 a 36,47 mg/mL. O perfil dos proteico, através de SDS-PAGE, evidenciou bandas com peso molecular entre 3 e 188 kDa. Quanto a análise dos polifenois totais, foram obtidos valores de 0,125 a 0,338 mg EAG/mL. Todas as amostras possuíram atividade antioxidante, entretanto, a avaliação isolada das mesmas identificou que grande parte desta atividade pode ser atribuída ao composto proteína-polifenois presente na Fração III A. Esta amostra possui uma banda proteica de aproximadamente 10 kDa que quando isolada continuou a apresentar uma grande capacidade antioxidante. |
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Entretanto, como estudos com outras fontes vegetais também relacionam as propriedades antioxidantes a compostos bioativos proteicos é importante a avaliação e caracterização das proteínas foliares de Ilex paraguariensis, uma vez que compostos bioativos naturais podem ser utilizados para a saúde como complementos ou ingredientes funcionais. Nesse contexto, o objetivo do estudo foi caracterizar as proteínas foliares de Ilex paraguariensis. Para tanto, folhas da planta passaram por diferentes processos de extração e fracionamento. Inicialmente, o material vegetal foi homogeneizado com Tampão Tris HCl 50 mM, pH 8, EDTA 1 mM, DTT 0,5 mM, 5% de Glicerol e 0,1% de Triton X100, filtrado e centrifugado; posteriormente precipitado com diferentes concentrações de sal e ainda dialisado e separado por membrana de ultrafiltração. 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Esta amostra possui uma banda proteica de aproximadamente 10 kDa que quando isolada continuou a apresentar uma grande capacidade antioxidante.The Ilex paraguariensis is a plant from Aquifoliaceae family, native from subtropical South America, consumed and produced on a large scale in the southern regions of Brazil. The interest in the plant is increasing as studies are developed showing many benefits of Ilex paraguariensis. Most of these studies associate the antioxidant activity with its phenolic composition. However, since studies with other plant sources have also correlated the antioxidant properties with proteinaceous bioactive compounds it is important the evaluation and characterization of the Ilex paraguariensis proteins leaves, since bioactive compounds can be used as supplements for health or functional ingredients. In this context, the aim of this study was to characterize the foliar proteins from Ilex paraguariensis. Therefore, the leaves have gone through different extraction processes and fractionation. Initially, the plant material was homogenized with 50 mM Tris HCl pH 8, 1 mM EDTA, 0.5 mM DTT, 5% glycerol and 0.1% Triton X100 buffer, than filtered and centrifuged; subsequently the material was precipitated at different salt concentrations, dialyzed and further separated through ultrafiltration membrane. The samples from each step of this process were evaluated for the amount of protein, total polyphenols, protein profile characterization (SDS-PAGE) and antioxidant activity. Regarding protein characterization, foliar concentration obtained was 5.29 to 36.47 mg/mL. The protein profile by SDS-PAGE showed bands with a molecular weight between 3 and 188 kDa. As for analysis of total polyphenols, values from 0.125 to 0.338 mg GAE/mL were obtained. All samples had antioxidant activity, however, the isolate evaluation of those showed that much of this activity can be attributed to the protein-polyphenol compound present in Fraction III A. This sample had a protein band of approximately 10 kDa that when isolated continued to present a great antioxidant capacity.UNISINOS - Universidade do Vale do Rio dos SinosPinto, Laura Massochin Nuneshttp://lattes.cnpq.br/3969350598305410Pereira, Danieli Hofmannhttp://lattes.cnpq.br/4843793811328733http://lattes.cnpq.br/0627260486404735Ramos, Renata Cristina de Souzahttp://lattes.cnpq.br/9200817607076236Rossi, Rochele CassantaUniversidade do Vale do Rio dos SinosPrograma de Pós-Graduação em Nutrição e AlimentosUnisinosBrasilEscola de SaúdeIsolamento e caracterização de proteínas foliares da Ilex paraguariensis St. Hil. (erva mate)ACCNPQ::Ciências da Saúde::NutriçãoIlex paraguariensisProteínasCompostos bioativosAtividade antioxidanteProteinsBioactive compoundsAntioxidant activityinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesishttp://www.repositorio.jesuita.org.br/handle/UNISINOS/3897info:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UNISINOS (RBDU Repositório Digital da Biblioteca da Unisinos)instname:Universidade do Vale do Rio dos Sinos (UNISINOS)instacron:UNISINOSORIGINALDanieli Hofmann Pereira.pdfDanieli Hofmann Pereira.pdfapplication/pdf2717765http://repositorio.jesuita.org.br/bitstream/UNISINOS/3897/1/Danieli+Hofmann+Pereira.pdfc14f06a083375b1fecbfdfbcb9e9d927MD51LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-82099http://repositorio.jesuita.org.br/bitstream/UNISINOS/3897/2/license.txte130fff006551e19abf270f718b7ab21MD52UNISINOS/38972015-06-16 15:42:20.563oai:www.repositorio.jesuita.org.br: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Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://www.repositorio.jesuita.org.br/oai/requestopendoar:2015-06-16T18:42:20Repositório Institucional da UNISINOS (RBDU Repositório Digital da Biblioteca da Unisinos) - Universidade do Vale do Rio dos Sinos (UNISINOS)false |
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A Ilex paraguariensis é uma planta da família Aquifoliaceae, nativa da região subtropical da América do Sul e consumida e produzida em larga escala nas regiões meridionais do Brasil. O interesse na planta vem aumentando a medida que estudos são desenvolvidos mostrando diversos benefícios da Ilex paraguariensis. A maioria destas pesquisas associa a atividade antioxidante da planta à sua composição fenólica. Entretanto, como estudos com outras fontes vegetais também relacionam as propriedades antioxidantes a compostos bioativos proteicos é importante a avaliação e caracterização das proteínas foliares de Ilex paraguariensis, uma vez que compostos bioativos naturais podem ser utilizados para a saúde como complementos ou ingredientes funcionais. Nesse contexto, o objetivo do estudo foi caracterizar as proteínas foliares de Ilex paraguariensis. Para tanto, folhas da planta passaram por diferentes processos de extração e fracionamento. Inicialmente, o material vegetal foi homogeneizado com Tampão Tris HCl 50 mM, pH 8, EDTA 1 mM, DTT 0,5 mM, 5% de Glicerol e 0,1% de Triton X100, filtrado e centrifugado; posteriormente precipitado com diferentes concentrações de sal e ainda dialisado e separado por membrana de ultrafiltração. As amostras obtidas em cada etapa deste processo foram avaliadas quanto à quantidade de proteínas, polifenois totais, caracterização de perfil proteico (SDS-PAGE) e atividade antioxidante. Em relação a caracterização proteica, a concentração foliar obtida foi de 5,29 a 36,47 mg/mL. O perfil dos proteico, através de SDS-PAGE, evidenciou bandas com peso molecular entre 3 e 188 kDa. Quanto a análise dos polifenois totais, foram obtidos valores de 0,125 a 0,338 mg EAG/mL. Todas as amostras possuíram atividade antioxidante, entretanto, a avaliação isolada das mesmas identificou que grande parte desta atividade pode ser atribuída ao composto proteína-polifenois presente na Fração III A. Esta amostra possui uma banda proteica de aproximadamente 10 kDa que quando isolada continuou a apresentar uma grande capacidade antioxidante. |
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