Arcabouços 3D funcionalizados ou não com Aptamer anti-fibronectina na formação do coágulo e sua influência em células-tronco. Estudo ex vivo e in vitro

• Autor(a) principal: Aguiar, Larissa Miranda
• Data de Publicação: 2020
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/58/58132/tde-06102022-163314/
• topic: 3D scaffold; Aptamers; Aptamers; Arcabouço 3D; Células-tronco; Clot; Coágulo; Fibronectin; Fibronectina; Regeneração; Regeneration; Stem cells

Aptamers são oligonucleotídeos capazes de se ligarem à alvos específicos com alta afinidade, especifidade e estabilidade por meio de sua conformação tridimensional. Em qualquer processo regenerativo, o sangue é o primeiro componente a entrar em contato com biomateriais. Dentre os biomateriais utilizados na regeneração periodontal, arcabouços tridimensionais (3D) têm sido estudados devido sua capacidade em proporcionar uma distribuição celular mais homogênea, favorecendo proliferação, migração e diferenciação celular. Assim, esse estudo avaliou o efeito da funcionalização de arcabouços 3D (SCA) com Aptamers anti-fibronectina (APT) na formação do coágulo fisiológico (PhC) e no comportamento de células-tronco (MSC) derivadas da medula óssea (BM- MSC) de ratos. Para isso, arcabouços 3D com e sem APT foram inseridos cirurgicamente na região subcutânea do dorso de ratos (isogênicos Wistar Kyoto) por 16 horas, permitindo a formação do PhC. Em seguida, o SCA com PhC foi removido, transferido para o laboratório e MSCs CD45- e CD90+ selecionadas por Soorting em citometria de fluxo (CF) foram então semeadas. Quatro grupos experimentais foram investigados: SCA+MSC; SCA+APT+MSC; SCA+PhC+MSC e SCA+APT+PhC+MSC. Para caracterização da população celular do PhC formado sobre o SCA foi realizada CF utilizando os marcadores CD45, CD90 e CD34. Para verificar a morfologia do PhC e das MSCs sobre o biomaterial foi utilizada Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV). Para avaliar a viabilidade celular, a formação de matriz mineralizada e a expressão da fosfatase alcalina (ALP) e da osteopontina (OPN) gerada pelas MSCs foi realizado MTT, ensaio de vermelho de Alizarina (ARS) e imunofluorescência indireta (IF) em microscópio Multifóton, respectivamente. Nos ensaios de MTT, ARS e IF não houve diferença estatisticamente significante entre os grupos testados. Entretanto, na CF o grupo SCA+APT+PhC+MSC demonstrou elevada imunomarcação do CD34 (p = 0,0198). Além disso, na MEV o mesmo grupo exibe uma enriquecida malha de fibrina, composta de células sanguíneas brancas. Sendo assim, foi observado que o APT possui um efeito seletivo no coágulo, proporcionando um maior recrutamento de células hematopoiéticas, importantes para a cicatrização e regeneração tecidual.