Avaliação de nanopartículas como sistema de entrega de antígenos em estratégias vacinais contra o vírus Zika (ZIKV).

• Autor(a) principal: Jesus, Monica Josiane Rodrigues de
• Data de Publicação: 2021
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42135/tde-06092024-182327/
• topic: Delivery Systems; Liposomes; Lipossomas; Nanoparticles; Nanopartículas; NS1; NS1; Sistema de Entrega; Vaccines; Vacinas; Vírus Zika; Zika virus

A febre zika figura na listagem da OMS como uma das doenças que exigem atenção pelo risco de novos surtos epidêmicos com capacidade de afetar a saúde pública global. A inexistência de tratamentos e vacinas eficazes reforça o caráter emergencial da ameaça. Portanto, estudos vacinais que demonstrem a segurança e eficácia na prevenção da doença é uma prioridade mundial. Estratégias vacinais baseadas em proteínas recombinantes são reconhecidamente seguras e foram tema do presente estudo. A utilização de nanopartículas como um sistema de entrega de antígenos é uma estratégia promissora, mas ainda pouco explorado para a prevenção da doença. O presente trabalho teve como principal objetivo desenvolver uma estratégia vacinal contra o vírus Zika (ZIKV) compostas por vesículas lipídicas nanomultilamelares, as NMVs. As nanopartículas foram combinadas a um antígeno recombinante de ZIKV com a capacidade de desencadear respostas imunológicas com potencial de proteção à infecção em condições experimentais. O trabalho consistiu na obtenção de antígenos recombinantes de ZIKV e vírus dengue (DENV) com enfoque na proteína NS1-ZIKV, um fragmento da porção C-terminal da proteína NS1. A escolha deste antígeno levou em conta o interesse vacinal e de diagnóstico com redução de riscos de efeitos adversos e aumento de especificidade, respectivamente. Foram estabelecidas as condições de expressão em linhagens de Escherichia coli e purificação dos antígenos por cromatografia de afinidade. A antigenicidade da NS1-ZIKV foi confirmada em ensaios feitos com soro de camundongos infectados com ZIKV. O antígeno foi combinado às NMVs em conjunto com um adjuvante derivado do lipídeo A bacteriano (MPLA), seguido por caracterização de propriedades físico-químicas das nanopartículas, incluindo carga, tamanho, porcentagem de incorporação e liberação do antígeno em diferentes condições. As NMVs carregadas também foram analisadas quanto ao potencial citotóxico in vitro e o efeito depósito in vivo. A imunidade protetora da vacina foi determinada após imunização de camundongos imunocompetentes da linhagem C57BL/6 com a NMVNS1-MPLA. Os animais imunizados tiveram a produção de IgG total e de subclasses (IgG1/IgG2c,) determinada por ELISA. Também foi analisado o impacto da compartimentalização do antígeno nas camadas lipídicas interna (I) e externa (E) das NMVs. Nas condições testadas, a formulação contendo o antígeno nas duas camadas lipídicas (NMVNS1-MPLA I/E) induziu maiores títulos de IgG anti-NS1 sérico, bem como altos títulos de (IgG1 e IgG2c). Os anticorpos gerados nos animais imunizados reconheceram eficientemente o dímero de NS1 presente nas membranas de células infectadas pelo ZIKV e induziram a redução da viremia induzida em condições experimentais. Em conjunto, os resultados demonstram que vacinas de subunidade baseadas em NMVs representam uma abordagem promissora para a potencialização de resposta imune humoral contra antígenos virais e abre perspectivas para o desenvolvimento de vacinas de subunidades contra a infecção pelo ZIKV.