Desenvolvimento de micobacteriófago recombinante para detecção rápida de bacilos da tuberculose

• Autor(a) principal: Silva, Joás Lucas da
• Data de Publicação: 2011
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-12092012-140428/
• topic: Micobacteriófagos; Mycobacteriophages; Recombinação; Recombineering; Tuberculose; Tuberculosis

O diagnóstico da tuberculose por métodos tradicionais é lento e laborioso. Por outro lado, os testes moleculares são rápidos, mas com custo elevado para países em desenvolvimento. Este projeto teve o objetivo de inserir no micobacteriófago D29 o gene que codifica a proteína verde fluorescente (eGFP) e estudar o fago recombinante na detecção rápida de bacilos da tuberculose. Para tanto, foi inserido o cassete Hsp60- eGFP no genoma do fago D29 por recombinação. Micobacteriófagos recombinantes purificados foram utilizados para infectar M. smegmatis mc2 155 e M. tuberculosis H37Rv durante um período de 1- 6h nas temperaturas de 30°C, 37°C e 42°C. Bactérias fluorescentes foram observadas em um período de 2h, mas em número reduzido, indicando que o micobacteriófago lisou às células rapidamente, dificultando a expressão da eGFP e visualização em microscópio de fluorescência. A deleção do gene LysA, foi efetuada a fim de aumentar o período de latência do fago. Não foi possível a purificação de fagos recombinantes, devido à baixa quantidade de recombinantes nos halos de inibição. Será necessário a redução da atividade o gene LysA e, provavelmente, de outros genes associados a lise celular a fim de aumentar a concentração de eGFP no interior da célula.