Perfil de expressão gênica de célula monocítica humana infectada por Leishmania (Leishmania) infantum

• Autor(a) principal: Ozaki, Christiane Yumi
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/99/99131/tde-25032019-151512/
• topic: Expressão gênica; Gene expression; Genetic sequencing; Leishmania infantum; Leishmania infantum; Lipid - Metabolism; Lipídeos - Metabolismo; Macrófagos; Macrophages; RNA; RNA; Sequenciamento genético

As leishmanioses são um conjunto de doenças causadas por parasitos de diferentes espécies do gênero Leishmania, sendo a leishmaniose visceral a causa de grande morbidade e mortalidade, principalmente, em países em desenvolvimento como o Brasil. Apesar dos inúmeros estudos focados na participação dos sistemas imunes inato e adaptativo na proteção ou desenvolvimento da doença, pouco se conhece das alterações que ocorrem na célula hospedeira no início da infecção. Ao mesmo tempo em que as células suscitam respostas que levam à eliminação do parasito, esse pode induzir alterações nos processos celulares para sua evasão, sobrevivência e proliferação. Para o entendimento desses processos propomos identificar as vias biológicas moduladas na infecção de células THP-1 por Leishmania infantum. Para isso, células monocíticas humanas THP-1 foram infectadas ou não por Leishmania infantum por 6, 10, 24, 48 e 72 h. A partir do RNA total dessas células, bibliotecas de cDNA foram obtidas e submetidas ao sequenciamento pela técnica de RNA-seq. Posteriormente, o número total de sequências por gene foi obtido por meio do alinhamento das sequências de DNA ao genoma humano de referência GRCh37 (hg19) empregando o programa CLC Genomics Workbench 7.1. Esses dados foram então utilizados na composição da matriz de dados de expressão gênica global das amostras, que serviu como base para obtenção de duas redes de co-expressão gênica utilizando o programa Weighted Gene Co-expression Network Analysis (WGCNA). As redes foram compostas pelos dados de expressão gênica global das amostras controle e infectadas dos períodos 6 h e 10 h (Rede 1) e 24 h, 48 h e 72 h (Rede 2). A partir da análise dessas redes foi possível selecionar módulos altamente correlacionados às amostras controle e infectadas nos diferentes períodos, realizar o enriquecimento funcional dos genes contidos nos módulos, como também identificar genes HGS-hub (genes hub diferencialmente expressos). O enriquecimento funcional dos genes contidos nos módulos altamente correlacionados com as amostras mostrou que as maiores mudanças no perfil de expressão gênica das células infectadas, em relação às células não infectadas, ocorreram nas primeiras 10 h de infecção e que muitos dos genes relacionados com a resposta imune são expressos nas primeiras 6 h de infecção. Já a partir de 24 h de infecção, pequenas alterações no perfil de expressão entre as células não infectadas e infectadas foram observadas. A determinação dos genes HGS-hub mostrou que dentre os processos biológicos alterados por Leishmania infantum nas células THP-1, o metabolismo de lipídios foi o que mais apresentou genes diferencialmente expressos, além da resposta imune. Esses resultados sugerem que além do sistema imune, a Leishmania infantum também é capaz de modular o metabolismo de lipídios das células THP-1 infectadas.