Expressão heteróloga, purificação, caracterização e estudos de modelagem molecular das proteínas quinases: piridoxal quinase (PdxK) de Trypanosoma cruzi e quinase dependente de ciclina 10 (CDK10) hum

• Autor(a) principal: Janku, Tatiane Aparecida Buzanello
• Data de Publicação: 2023
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/75/75133/tde-04102023-085323/
• topic: CDK10 humana; human CDK10; piridoxal quinase de Trypanosoma cruzi; protein kinases; proteínas quinases; pyridoxal kinase Trypanosoma cruzi

As proteínas quinases são responsáveis pela regulação de diversos processos celulares e atuam por meio do mecanismo de fosforilação. Desta maneira, estas proteínas apresentam-se como bons candidatos a alvos farmacológicos. Neste trabalho foram estudadas duas proteínas quinases, a piridoxal quinase (PdxK) do protozoário Trypanosoma cruzi (T. cruzi) e a quinase dependente de ciclina 10 (CDK10) humana. A PdxK de T. cruzi é uma enzima chave para a formação de piridoxal 5\'-fosfato, que atua como cofator em diversas reações e é de fundamental importância para o metabolismo do protozoário, logo, é um interessante alvo farmacológico. Já a CDK10 humana, também conhecida como PISSLRE, pertence à família das quinases dependentes de ciclina e apresenta como parceira, a ciclina M. Estudos mostraram que a CDK10 participa da fosforilação do fator de transcrição ETS2, controlando sua estabilidade; é um fator de resistência a terapias endócrinas no câncer de mama e promove o crescimento celular, inibindo a apoptose em células de câncer colorretal. Como as duas proteínas quinases mencionadas (PdxK de T. cruzi e CDK10 humana) são pouco estudadas e candidatas potenciais a alvos terapêuticos, o objetivo deste trabalho consistiu na obtenção de ambas as proteínas por meio da expressão de proteínas recombinantes heterólogas em Escherichia coli (E. coli), seguido pela purificação e pela realização de estudos de caracterização. Além disso, ambas não possuem estrutura cristalográfica depositada em banco de dados até o momento, por isso outro objetivo foi realizar a modelagem molecular destas proteínas utilizando ferramentas de bioinformática, para estudos futuros de docagem molecular. Em relação aos resultados obtidos, foi possível expressar as duas proteínas em E. coli. Entretanto, não foram alcançados resultados satisfatórios em relação aos ensaios de purificação da CDK10 humana, e, portanto, não foi possível realizar estudos de caracterização da CDK10 humana; situação diferente em relação à PdxK, uma vez que os resultados foram satisfatórios. A partir de amostras de PdxK com alto grau de pureza foram realizados ensaios de atividade da enzima, confirmando que estava ativa. Por fim, foram obtidos os modelos das estruturas de cada proteína por modelagem molecular. Futuramente, os resultados obtidos poderão ser utilizados em estudos de docagem molecular com pequenas moléculas inibidoras.