Caracterização comportamental, eletrofisiológica e celular do abrasamento rápido da amígdala e dos tratamentos com estímulos olfatórios e com HUF-101, um potente análogo do canabidiol

• Autor(a) principal: Polianna Delfino Pereira
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://doi.org/10.11606/T.17.2019.tde-30092022-153219

Cerca de 30% dos pacientes com Epilepsia do Lobo Temporal (ELT) não respondem aos atuais tratamentos e uma possível razão é a compreensão restrita dos mecanismos básicos envolvidos nas Epilepsias. Estudos indicam que a exposição a um estímulo olfatório é capaz de modular a ocorrência das crises epilépticas. Adicionalmente, cresce o uso do Canabidiol (CBD) como tratamento alternativo e complementar nas Epilepsias, entretanto, uma promissora opção é seu derivado sintético fluorado, o HUF-101. Assim, os objetivos deste estudo foram: (Capítulo I) Investigar em modelo animal as Epilepsias e sua repercussão na função cognitiva (aprendizado e memória), associada a potencial neurogênese hipocampal aberrante. (Capítulo II) Avaliar os efeitos do 2,5-Dihydro-2,4,5-trimethylthiazoline (TMT, incluindo nanoemulsão) e da estimulação elétrica hipotalâmica, nas respostas defensivas inatas ou condicionadas, sob uma variedade de condições. (Capítulo III) Verificar os efeitos eletrencefalográficos (EEGráficos) da exposição ao TMT, nas crises límbicas induzidas pelo Abrasamento Rápido da Amígdala (ARA). (Capítulo IV) Avaliar os efeitos da administração aguda de HUF-101, um potente derivado fluorado sintético do CBD, no ARA, um modelo experimental de ELT. Para tanto foram realizados diferentes protocolos: (Capítulo I) Ratos Wistar-Old machos (280-300 g) foram submetidos ao procedimento cirúrgico para implante de eletrodos, subsequentemente os animais foram expostos ao protocolo de ARA, que consistiu em 10 estimulações elétricas diárias, durante 2 dias consecutivos. Quarenta e oito horas após foram submetidos ao Labirinto Aquático de Morris (LAM) e seus cérebros foram processados para imunoistoquímica de Duplacortina, em adição foram realizadas análises comportamentais (Escala de Racine/Pinel & Rovner e para o LAM), EEGráfica e histologia para Nissl (CEUA: 133/2015). (Capítulo II) (Protocolo 1) Ratos Sprague Dawley machos adultos foram expostos à seguinte sequência de testes: Sobressalto Potencializado pelo Medo, Condicionamento Contextual com Estímulo Olfatório (Acetato de Amila ou TMT ou Veículo Nanoelmulsão ou TMT Nanoemulsão), Labirinto em Cruz Elevado, Campo Aberto, extração seriada e dosagem da Corticosterona e dissecção da Glândula Adrenal. (Protocolo 2) Ratos Wistar-Old machos adultos receberam 4 preparações (5 µL em cada narina) na seguinte sequência: sem odor (apenas estímulo mecânico), água, nanoemulsão contendo veículo e nanoemulsão contendo TMT, após foi realizado a neuroetologia. (Protocolo 3): Ratos Wistar-Old machos adultos após implante dos eletrodos foram submetidos a estimulação elétrica hipotalâmica (intensidade crescente da corrente: 100-1000 µA), ao final foi realizada a análise neuroetológica (CEUA: 20/2019). (Capítulo III) Ratos Wistar-Old machos (280-300 g) após estereotaxia, parte dos animais foi exposta a câmara saturada com Água ou TMT, enquanto a outra parte, após o ARA e previamente ao 21º estímulo, foi submetida a exposição olfatória, também com Água ou TMT. A atividade EEGráfica foi avaliada pela ocorrência da 1º e 2º pós descargas e pela Transformada Rápida de Fourier (CEUA: 200/2011). (Capítulo IV) Ratos Wistar-Old machos adultos após cirurgia estereotáxica foram submetidos ao ARA, no 3º dia foram injetados com veículo ou HUF-101 (10 mg/kg; i.p). Trinta minutos após o tratamento, os animais foram expostos ao estímulo teste. Respostas comportamentais foram classificadas de acordo com a Escala de Racine/Pinel & Rovner e sequências comportamentais (análise neuroetológica), além disso, foi realizada análise EEGráfica (CEUA: 27/2019). Os resultados indicaram: (Capítulo I) A Epilepsia induzida pelo ARA não interferiu na função cognitiva (aprendizado e memória espacial), associado à ausência da neurogênese hipocampal aberrante. (Capítulo II) O TMT líquido induziu respostas de medo inato, mas não medo condicionado ao contexto, além disso, desencadeou comportamentos tipo ansiosos, sem alterar a atividade locomotora. Adicionalmente, ratos expostos agudamente ao TMT apresentaram aumento da secreção de Corticosterona e do peso das Adrenais. Enquanto o TMT nanoemulsão não interferiu substancialmente nas respostas comportamentais de medo inato. E por último, a estimulação hipotalâmica induziu importantes comportamentos defensivos. (Capítulo III) Avaliações comportamentais e EEGráficas confirmaram que o TMT, um estímulo olfatório com forte relevância biológica (cheiro de predador), reduziu significativamente as crises epileptiformes límbicas. (Capítulo IV) A administração aguda do derivado fluorado sintético do CBD, o HUF-101 (10 mg/kg i.p.) apresentou efeito anticonvulsivante no ARA. Dados adicionais e complementares indicaram efeito neuroprotetor do HUF-101 somente após indução do Status Epilepticus, mas não no ARA.