A two-plasmid strategy for engineering a dengue virus type 3 infectious clone from primary Brazilian isolate

• Autor(a) principal: Santos, Jefferson J. S.
• Data de Publicação: 2014
• Outros Autores: Cordeiro, Marli T., Bertani, Giovani R., Marques, Ernesto T. A., Gil, Laura H. V. G.
• Tipo de documento: Artigo
• Idioma: eng
• Título da fonte: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
• DOI: 10.1590/0001-3765201420130332
• Texto Completo: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/23258
• topic: Genética reversa; Vírus dengue; Clonagem molecular; Clone infeccioso; Reverse genetics; Dengue virus; Molecular cloning; Infectious clone; Genética; Plasmídeos; Transcrição Genética; Replicação Viral; Brasil; Células Clonais; DNA; Vírus da Dengue; Classificação; RNA Viral

As infecções causadas por dengue representam uma das mais prevalentes doenças transmitidas por artrópodes mundialmente, causando um amplo espectro de manifestações clínicas. A tecnologia de clones infecciosos é uma importante ferramenta para o entendimento da biologia do vírus da dengue (DENV). Clones de cDNA infeccioso têm sido construídos para muitos vírus de RNA com cadeia positiva e são ferramentas valiosas para o estudo dos mecanismos moleculares envolvidos na replicação do genoma viral, montagem da partícula viral, patogênese viral, e desenvolvimento de vacinas. No presente trabalho, nós descrevemos o desenvolvimento de um clone infeccioso baseado num isolado primário brasileiro do vírus Dengue sorotipo 3 (DENV3), genótipo III. Usando uma estratégia de dois plasmídeos, o genoma viral foi dividido em duas partes e os fragmentos gerados foram clonados separadamente num vetor shuttlelevedura-bactéria. Os plasmídeos foram construídos pela técnica de recombinação homóloga em levedura e a transcrição do genoma completo foi realizada a partir ligação in vitro das duas partes do genoma. O transcrito de DENV3 se mostrou infeccioso quando transfectado em células BHK-21 e a identidade do clone infeccioso foi confirmada por caracterização in vitro. A cinética de crescimento do DENV3 gerado neste sistema foi indistinguível do vírus parental. Este sistema representa uma poderosa ferramenta que ajudará na elucidação de aspectos moleculares da biologia do DENV bem como no estudo de mutações associadas com patogênese do DENV.