Isolamento, caracterização fenotípica e molecular de cepas de Cronobacter spp. de alimentos e de origem clínica no Brasil

• Autor(a) principal: Brandão, Marcelo Luiz Lima
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
• Texto Completo: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/38978
• topic: Cronobacter; Alimentos; Isolamento; Identificação; MLST; Antibiograma; Cronobacter; Food; Isolation; Identification; MLST; Antibiogram; Cronobacter; Contaminação de Alimentos; Alimentos Infantis; Fórmulas Infantis; Tipagem de Sequências Multilocus; Testes de Sensibilidade Microbiana

Cronobacter é uma bactéria oportunista que causa infecções em neonatos devido ao consumo de fórmulas infantis desidratadas contaminadas (FID). Atualmente, sabe-se que Cronobacter pode causar infecções em indivíduos de qualquer idade, sendo em idosos e imunossuprimidos sua maior prevalência. Nestes grupos, outros alimentos foram sugeridos como veículos de contaminação. O objetivo deste trabalho foi isolar e caracterizar cepas de Cronobacter spp. de alimentos, utensílios e sítios clínicos. Foi realizada a pesquisa de Cronobacter spp. em 30 amostra de FID para crianças de 0-6 meses, 30 de FID de seguimento para crianças >6 meses, 30 de alimentos infantis para crianças de maior idade, 30 de temperos/condimentos e 30 de produtos farináceos. Foram avaliadas três metodologias para o isolamento de Cronobacter spp. e três procolos da reação em cadeia pela polimerase (PCR) com alvo nos genes rpoB, cgcA e gyrB. Os isolados foram avaliados pelo esquema de biogrupos, perfil de suscetibilidade a antimicrobianos e Multi Locus Sequence Typing. Em paralelo, foi realizada uma investigação de um surto causado por Cronobacter spp. em um hospital na cidade de Teresina-PI. Cronobacter spp. não foi detectada em nenhuma amostra de FID, mas foi isolada a partir de amostras de alimentos infantis destinados a crianças de maior idade (7/30; 23,3%), produtos farináceos (20/30; 66,7%) e temperos/condimentos (11/30; 36,7%). O uso do Cronobacter Screening Broth no enriquecimento-seletivo e do ágar DFI para o isolamento foi considerado o método mais eficiente. Foram identificadas cepas de quatro espécies: C. sakazakii (n=41), C. malonaticus (n=8), C. dublinensis (n=3) e C. muytjensii (n=2), e os três protocolos de PCR utilizados para identificação das espécies de Cronobacter foram considerados eficazes por apresentaram resultados concordantes com o sequenciamento do gene fusA. As cepas foram classificadas em nove biogrupos e apenas uma cepa de origem clínica de C. malonaticus apresentou resistência intermediária a ampicilina-sulbactan e resistência a ceftriaxona e cefuroxima. Dois clones distintos da espécie C. malonaticus ST394 e ST440, que não foram agrupados em nenhum complexo clonal, foram identificados como responsáveis pelas infecções dos pacientes no surto. Não foi possível identificar o veículo de contaminação do surto, uma vez que o patógeno não foi isolado nas amostras de alimentos suspeitas que foram ingeridas pelos pacientes. Foram identificados 32 tipos sequenciais (ST), incluindo cinco cepas identificadas como ST4, que é o mais patogênico descrito até o momento. Dezesseis ST novos foram descritos neste estudo: ST394, ST395, ST396, ST397, ST398, ST402, ST413, ST432, ST433, ST434, ST435, ST436, ST437, ST438, ST439 e ST440; e foram descritos 25 alelos novos. A relação de 1,5 cepas por ST encontrada neste estudo demostra uma baixa clonalidade do gênero. A identificação de 16 novos ST entre os 36 ST encontrados, que corresponde quase à metade (44,4%), indica que a realização de mais estudos sobre a genética de populações do gênero Cronobacter são necessários para identificação dos ST com maior potencial patogênico e suas relações com cepas ambientais, auxiliando assim na criação de medidas de controle destes patógenos e na identificação de surtos.