Resposta imunitária inflamatória de macrófagos na presença de inibidores de efluxo

• Autor(a) principal: GABRIEL, Marta Isabel Martins
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10362/19084
• topic: Ciências biomédicas; Parasitologia médica; Macrófagos; Inibidores de efluxo; Leishmania infantum; Terapêutica; Domínio/Área Científica::Ciências Médicas

Os macrófagos (MØ) são as principais células efetoras do sistema imunitário, capazes de fagocitar e destruir os agentes patogénicos, desempenhando um papel crucial na defesa imunitária inata. Estas células albergam mecanismos microbicidas, tais como a acidificação dos fagolisossomas e a produção de espécies reativas de oxigénio (ROS) e de azoto (RNS). Os inibidores de efluxo (EI), tais como verapamil (VP), tioridazina (TZ), clorpromazina (CPZ), ouabaína (OUAB) podem transformar MØ com reduzida capacidade para destruir agentes patogénicos fagocitados em células microbicidas. No entanto, o papel indireto dos EI na modulação da acidificação intracelular e stress oxidativo, contribuindo para o incremento da função microbicida dos MØ, ainda não é claro. A leishmaniose é uma doença parasitária de grande impacto mundial, cujo controlo continua a ser um problema por resolver devido aos medicamentos disponíveis terem efeitos colaterais importantes. Por estes motivos, procedeu-se à procura de estratégias que promovam a redução das doses dos fármacos antileishmania, minimizando os efeitos secundários e potenciando a cura. Este estudo tem como objetivo avaliar o efeito dos EI e do composto natural [6]-gingerol na resposta inflamatória dos MØ usando Leishmania infantum como modelo de infeção intracelular. A estimulação de MØ com lipopolissacarídeo (LPS) foi utilizada como controlo positivo de inflamação. A modulação de bombas de efluxo da linha macrofágica utilizada neste estudo pelo EI foi confirmada através do método fluorométrico semi-automático de quantificação da acumulação de EtBr em tempo real. Para além de agirem como moduladores de efluxo, VP, TZ, CPZ, OUAB e [6]-gingerol promoveram o aumento da eliminação dos parasitas, com diferentes graus de eficácia. A laranja de acridina e o Lysotracker red foram utilizados para avaliar por microscopia de fluorescência o efeito dos EI na acidificação intracelular de MØ infetados com L. infantum. Foi observado que [6]-gingerol inibiu a acidez intracelular. Pelo contrário, o VP, TZ, OUAB e CPZ promoveram a acidificação. O stress oxidativo dos MØ, nomeadamente a produção de ROS e RNS foi analisada pela através da emissão da fluorescência, usando dihidrorodamina e pela reação de Griess, respetivamente. O [6]-gingerol não induziu a produção de ROS pelas células infetadas e células estimuladas com LPS. No seu conjunto, os resultados sugerem que o [6]-gingerol é um composto antioxidante. Por outro lado, VP aumentou a produção de ROS e RNS, e CPZ conduziu ao aumento da produção de RNS sugerindo que estes compostos são indutores de stress oxidativo. Todos os EI, mas em particular OUAB e [6]-gingerol parecem ajudar a resposta imune inata, tanto em MØ estimulados por LPS como em MØ infetados com L. infantum. Em estudos futuros, a associação de EI com fármacos antileishmania pode vir a ser vantajosa para aumentar a eficiência da terapêutica.