Implications of second allele alterations for mismatch repair protein deficiency screening

• Autor(a) principal: Oliveira, Bela Margarida Amaral
• Data de Publicação: 2021
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: eng
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10348/10500
• topic: Síndrome de Lynch,; Cancro do endométrio

A síndrome de Lynch é uma das síndromes de cancro hereditário mais frequentes. Nas mulheres, os tumores ginecológicos, nomeadamente o cancro do endométrio, podem surgir como a primeira manifestação da doença. Esta síndrome é autossómica dominante e resulta maioritariamente de mutações germinativas num dos quatro genes das proteínas de reparação “mismatch” do ADN. A inativação bialélica do gene leva à perda completa da função destas proteínas, o que impede a deteção e reparo de mutações no ADN e leva à acumulação de erros da replicação em sequências repetitivas do ADN, associados à instabilidade dos microssatélites e, consequentemente, a um aumento da predisposição ao desenvolvimento de tumores. O principal objetivo deste estudo é determinar as implicações das alterações somáticas do segundo alelo para o rastreio de alterações da reparação “mismatch” do ADN e diagnóstico de síndrome de Lynch, com foco no estudo imunohistoquímico destas proteínas e na análise de metilação do promotor do gene MLH1 de doentes com cancro do endométrio. Selecionamos as doentes cujos tumores apresentavam alteração da expressão da proteína MLH1, o DNA foi extraído de amostras de tumor, submetido a modificação por bissulfito seguida de amplificação por PCR quantitativo específico de metilação (qMSP), e a amplificação multiplex de sondas dependentes de ligação específica para metilação (MSMLPA). Os dois métodos mostraram resultados concordantes. Com base nos resultados, fomos capazes de distinguir três grupos de metilação: o primeiro, com doentes cujos tumores não apresentam metilação em nenhum alelo, o segundo com doentes cujos tumores apresentam metilação parcial, provavelmente em apenas um alelo e, por último, doentes cujos tumores apresentam metilação em ambos os alelos. A grande maioria das doentes que prosseguiram para a pesquisa de mutações germinativas pertencia ao primeiro grupo, e as doentes dos outros grupos raramente foram testadas. O estudo imunohistoquímico mostrou que a expressão de MLH1/PMS2 pode ser completamente perdida, mas também se pode apresentar como perda subclonal e diminuição da imunoexpressão. Todos esses padrões de imunoexpressão podem estar associados à síndrome de Lynch. Em conclusão, demonstramos que o diagnóstico da síndrome de Lynch em doentes com cancro do endométrio é altamente dependente dos resultados da imunohistoquímica e da metilação do MLH1. Todos os padrões alterados de imunohistoquímica devem ser levados em consideração. Doentes com metilação parcial de MLH1, muito provavelmente têm apenas um alelo metilado, putativamente como second-hit e, portanto, podem ser considerados para o teste de mutações germinativas. Ao incluir estas doentes no rastreio de síndrome de Lynch, é expectável um pequeno aumento no número de doentes identificados. No entanto, devemos ter em mente que, quando identificamos uma doente com síndrome de Lynch, também estamos a identificar toda uma família com esta síndrome.