Estudo da resistência aos anti-maláricos: desenvolvimento de um novo teste de sensibilidade do Plasmodium spp., baseado na detecção de hemozoína

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Meira, Teresa Maria Monteiro Maurício Lopes
Data de Publicação: 2009
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
Texto Completo: http://hdl.handle.net/10451/3661
Resumo: Tese de mestrado, Bioquímica (Bioquímica Médica), Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2009
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spelling Estudo da resistência aos anti-maláricos: desenvolvimento de um novo teste de sensibilidade do Plasmodium spp., baseado na detecção de hemozoínaHemozoínaAnti-maláricosTeste de susceptibilidade in vitroCitometria de fluxoTeses de mestrado - 2009Tese de mestrado, Bioquímica (Bioquímica Médica), Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2009A malária é conhecida pela sua elevada morbilidade e mortalidade. Estima-se que em 2006, tenha havido 247 milhões de casos de malária e um milhão de mortes. O número de casos esta a aumentar, associado à um aumento da resistência aos fármacos antimaláricos. Por causa disso, é de extrema importância que se desenvolvam métodos rápidos para o estudo da sensibilidade do P. falciparum. Com o presente estudo pretendeu-se desenvolver uma nova metodologia para a detecção do pigmento malárico, baseado na citometria de fluxo. A ideia é desenvolver um teste de sensibilidade do Plasmodium spp aos anti-maláricos que funciona sem adição de reagentes. Foi utilizada a espécie P.berghei ANKA, transfectados com a proteína GFP, uma espécie que infecta ratinhos. Nos eritrócitos parasitados estudou-se o efeito da cloroquina, para o estabelecimento de curvas dose – resposta ao fármaco. O sangue de ratinho foi colhido e incubado com diferentes concentrações de fármaco. As células foram analisadas após incubação de uma, duas, três horas e overnight. O efeito inibitório da cloroquina foi detectado por determinação de eritrócitos que expressaram uma despolarização elevada, e por análise do grau da expressão da GFP. Com base na detecção da despolarização, verifica-se um efeito inibitório logo após a primeira hora de incubação, por análise das curvas dose-resposta da cloroquina. Este efeito aumenta até às 3 horas de incubação. Ao contrário disso, nenhum efeito é visível na análise do GFP. Este trabalho mostra que é possível observar o efeito inibitório da cloroquina em células infectadas com P. berghei ANKA, com base na detecção de hemozoína. Este método por ser rápido e robusto, pode ser a base de um novo teste de susceptibilidade in vitro de Plasmodium spp a anti-maláricos.Malaria is well known for its high morbidity and mortality rates. In 2006, an estimated 246 Million cases occurred, causing around 1 million deaths. Yet, the number of cases is still rising, associated to an increasing problem of resistance to antimalarial drugs. Because of this, the development of rapid methods to detect drug resistance is of paramount importance. The present study had has objective the redevelopments of a novel method to detect the malarial pigment, based on flow cytometric principles. The idea was to develop a new sensitivity test for antimalarial drugs for Plasmodium spp. , that would work without additional reagents. The murine P. berghei ANKA strain, a strain that has been transfected with green fluorescent protein (GFP) was used. The parasitized erythrocytes were studied to establish a dose-response curve of the drug. The blood of infected mice was incubated with different concentrations of the drug. The cells were analysed after 1, 2, 3 and overnight incubation. The inhibitory effect of choloroquine was detected measuring the expression of depolarization in infected erythrocytes, as well as the GFP expression. V Based on the depolarization an inhibitory effect was noted after only one hour, and the effect was more pronounced at three hours. Contrary to this, no effect was observed when the GFP expression was analysed. This study shows that it is possible to observe the inhibitory effect of choloroquine on P. berghei ANKA infected erythrocytes, based on the detection of hemozoin. This method may be a rapid and robust way to develop a novel in-vitro sensitivity test for Plasmodium spp.Hänscheid, Thomas, 1964-Meireles, Margarida, 1955-Repositório da Universidade de LisboaMeira, Teresa Maria Monteiro Maurício Lopes2011-07-07T15:18:25Z20092009-01-01T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10451/3661porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2023-11-08T15:44:14Zoai:repositorio.ul.pt:10451/3661Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireopendoar:71602024-03-19T21:29:30.546069Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãofalse
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