Análise serológica e imunoquímica de potenciais antigénios para a pesquisa de anticorpos anti-Plasmodium falciparum em pacientes com malária importada

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Costa, Rita de Cássia Guimarães Medina, 1984-
Data de Publicação: 2011
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
Texto Completo: http://hdl.handle.net/10451/8733
Resumo: Tese de mestrado em Bioquímica, apresentada à Universidade de Lisboa, através da Faculdade de Ciências, 2011
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spelling Análise serológica e imunoquímica de potenciais antigénios para a pesquisa de anticorpos anti-Plasmodium falciparum em pacientes com malária importadaMaláriaPlasmodium falciparumAnticorpos anti-P. falciparumELISAWestern BlotTeses de mestrado - 2011Tese de mestrado em Bioquímica, apresentada à Universidade de Lisboa, através da Faculdade de Ciências, 2011A Malária é uma doença infecciosa causada por um protozoário parasita do género Plasmodium e é transmitida pela fêmea do mosquito Anopheles. A mais importante das cinco espécies de Plasmodium, responsáveis pela malária humana, é o Plasmodium falciparum. Cerca de 300 milhões de casos clínicos ocorrem todos os anos, resultando em aproximadamente dois milhões de mortes, na sua maioria na África Subsariana. Cerca de 40% da população mundial está em risco e não se sabe como é que as alterações climáticas podem afectar esta distribuição. O parasita tem um ciclo de vida complexo iniciando-se no homem, com a invasão dos hepatócitos seguida de invasão dos eritrócitos (RBC). Esta última, consiste em vários ciclos de invasão e ruptura dos RBCs, e corresponde à fase sintomática da doença. Não existe vacina eficaz contra a malária e os testes de diagnóstico rápido são uma componente crucial na estratégia de controlo da malária e vigilância epidemiológica da malária. A imunização com antigénios da fase eritrocitária, principalmente antigénios de merozoítos, tem-se mostrado protectora em vários modelos animais e com algum efeito protector em seres humanos. Estudos em humanos e em modelos animais têm demonstrado que a resposta imunitária dirigida a antigénios da fase eritrocitária pode ser protectora e facilitar o controlo da infecção. Sabe-se que em regiões endémicas a imunidade natural adquirida contra P. falciparum é mediada por anticorpos do tipo IgG. Apesar da importância global do P. falciparum, a grande maioria das suas proteínas ainda não foram caracterizadas experimentalmente. Assim sendo, o principal objectivo do presente estudo é avaliar a reactividade serológica de amostras de soros de indivíduos potencialmente expostos a Plasmodium falciparum, a maioria oriundos de países africanos, frente a antigénios nativos do parasita e posterior identificação das principais proteínas imunogénicas. De forma atingir os objectivos propostos, inicialmente, procedeu-se ao cultivo do Plasmodium falciparum (3D7) num sistema de cultura in vitro de RBCs, seguindo-se da extracção das proteínas nativas totais do parasita e a sua quantificação pelo método de Bradford. Através de ensaios imunoenzimáticos (ELISA) distinguiu-se a população negativa da positiva, frente a um grupo controlo (soros de pacientes saudáveis de Portugal, que nunca estiveram em zonas de malária endémica). Os soros que apresentaram maior reactividade por ELISA foram analisados por Western Blot. A análise dos perfis de Western Blot demonstrou um padrão consistente no que diz respeito à imunoreactividade de antigénios com massas moleculares na faixa 30 a 60 kDa. Observou-se que a imunoreactividade dos soros dos pacientes potencialmente expostos a Plasmodium falciparum corresponde à imunogenicidade de alguns antigénios predominantes em extractos de proteínas totais dos parasitas. As proteínas identificadas neste estudo podem ser o ponto de partida para estudos mais detalhados no que diz respeito a estratégias de controlo e prevenção da doença.Malaria is an infectious disease caused by a protozoan of the genus Plasmodium and is transmitted by the female of the Anopheles mosquito. Plasmodium falciparum is the most important of the five species of Plasmodium, responsible for human malaria. About 300 million clinical cases occur each year, resulting in approximately two million deaths, mostly in the Sub-Saharan Africa. About 40% of the world population is at risk and it is unclear how climate changes may affect this distribution. The parasite has a complex life cycle, starting in the man with the invasion of hepatocytes followed by invasion of erythrocytes (RBC). The latter consists of several cycles of invasion and rupture of RBCs, corresponding to the symptomatic phase of the disease. There is no effective vaccine against malaria, and rapid and efficient diagnostic tests are crucial components in the strategy of malaria control and epidemiological surveillance of the disease. Immunization with antigens of the erythrocytic phase, particularly antigens from merozoites, has been shown to be protective in various animal models and to have some protective effect in humans. Studies in human and animal models have shown that the immune response directed to erythrocytic stage antigens may be protective and facilitate the control of infection. It is known that in endemic areas naturally acquired immunity against P. falciparum is mediated by IgG antibodies. Despite the global importance of P. falciparum, the vast majority of its proteins have not yet been experimentally characterized. Therefore, the main objective of this study is to evaluate the serological reactivity of serum samples from individuals, mainly from African countries, who have potentially been exposed to P. falciparum, compared to native parasite antigens and subsequent identification of major immunogenic proteins. In order to achieve the proposed objectives, we initially cultivated the parasite P. falciparum (3D7) in an in vitro system of RBCs, followed by the extraction of total native proteins from the parasite and its quantification by the Bradford method. We have also used enzyme immunoassays (ELISA) to distinguish a negative from a positive population, compared to a control group of healthy individuals (n = 23) from Portugal, who have never been in areas which are endemic to malaria. Sera displaying greater reactivity to anti-XIV P.falciparum antibodies by ELISA were analyzed by Western blotting. The analysis of the Western blot profiles demonstrated a consistent pattern with respect to the immunoreactivity of antigens with molecular masses ranging from 30 to 60 kDa. It was observed that the immunoreactivity of the sera of patients potentially exposed to P. falciparum corresponds to some of the antigens prevalent in total protein extracts from parasites. The proteins identified in this study may be the starting point for more detailed studies regarding control strategies and disease prevention.Silva, Marcelo SousaSilva, Marta SousaRepositório da Universidade de LisboaCosta, Rita de Cássia Guimarães Medina, 1984-2013-07-04T13:09:32Z20112011-01-01T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10451/8733porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2023-11-08T15:52:39Zoai:repositorio.ul.pt:10451/8733Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireopendoar:71602024-03-19T21:33:08.214631Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãofalse
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