Desenvolvimento e otimização de um biossensor de infeções por Staphylococcus aureus usando proteínas recombinantes

• Autor(a) principal: Ganhão, Pedro Miguel Reis
• Data de Publicação: 2022
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10362/132851
• topic: Staphylococcus aureus; Peptidoglicano; Lisostafina; Domínio Catalítico; Biossensor; Domínio/Área Científica::Engenharia e Tecnologia::Outras Engenharias e Tecnologias

Staphylococcus aureus é um agente patogénico oportunista com elevada capacidade de adaptação a diferentes ambientes, causando um número significativo de infeções, a nível hospitalar e na comunidade, com elevadas taxas de mortalidade e morbilidade. S. aureus tem também a capacidade de adquirir de terminantes de resistência aos antibióticos existentes, sendo dos agentes patogénicos mais importantes a nível clínico. Desta forma, são necessários métodos eficientes para a deteção de S. aureus, permitindo tratamento direcionado, e eliminando a utilização inapropriada de antibióticos. O objetivo desta tese foi o desenvolvimento de um biossensor, baseado na proteína Lisostafina, de forma a detetar especifica mente S. aureus, em amostras clínicas. A Lisostafina é composta por um domínio de ligação ao pepti doglicano, e um domínio catalítico, ambos com a capacidade de interagir com o peptidoglicano de S. aureus. Diferentes proteínas recombinantes foram construídas e sobre-expressas de forma a testar cada um dos domínios da Lisostafina, individualmente. O domínio catalítico associado a uma cisteína termi nal (Proteína Domínio Catalítico-Cys) demonstrou, relativamente às restantes proteínas recombinantes, elevada especificidade de ligação a células de S. aureus, não tendo capacidade de ligação às restantes espécies bacterianas testadas, e também capacidade hidrolítica reduzida comparativamente à Lisostafina ou ao Domínio Catalítico. Estas características levaram a que a proteína Domínio Catalítico-Cys fosse escolhida para utilização no biossensor. O protótipo do biossensor foi montado, através da imobilização da proteína num suporte de vidro e a deteção foi realizada usando cristal líquido nemático 5CB e um microscópio de luz polarizada. Este protótipo permitiu diferenciar S. aureus de Escherichia coli, Staphylococcus epidermidis e Staphylococcus haemolyticus. No futuro, será avaliada a capacidade de deteção de muropéptidos, de diferentes microrganismos, e posteriormente, a funcionalidade do biossen sor na prática clínica, através do uso de amostras biológicas.