Caracterização da NADH-menaquinona oxidorredutase do tipo II de M. tuberculosis: um novo alvo terapêutico no combate à tuberculose?

• Autor(a) principal: Nunes, Tiago Filipe do Carmo
• Data de Publicação: 2015
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10362/127534
• topic: Tuberculose; Mycobacterium tuberculosis; NADH-menaquinona oxidorredutase do tipo II; alvo terapêutico; atividade enzimática; Domínio/Área Científica::Engenharia e Tecnologia::Outras Engenharias e Tecnologias

A tuberculose pulmonar (TB) causa cerca de 2 milhões de mortes por ano, estimando-se ainda que um terço da população mundial esteja infetado por Mycobacterium tuberculosis. O tratamento da TB é moroso e exigente, levando muitas vezes ao seu abandono, resultando no aparecimento de estipes multirresistentes (MDR-TB) ou extensivamente resistentes (XDR-TB) aos fármacos utilizados. Estudos recentes identificaram a NADH-menaquinona oxidorredutase do tipo II (NDH-2) de M. tuberculosis como uma enzima-chave da cadeia respiratória deste organismo. A NDH-2 não tem homólogos na mitocôndria humana, o que a torna um excelente alvo para novos fármacos anti-TB. O presente trabalho teve como objetivo a caracterização da NDH-2 como possível alvo terapêutico. Para tal, foram realizados ensaios de atividade enzimática da NDH-2, em ambiente membranar, na presença de compostos com atividade antimicobacteriana, nomeadamente, clofazimina (CFZ), flupentixol (FPX), tioridazina (TZ), verapamil (VP), PR e U4. Este estudo permitiu determinar os valores de concentração de composto que inibem 50% da atividade da enzima (IC50). Foi ainda realizado um estudo cinético mais detalhado para o PR com o objetivo de determinar os parâmetros cinéticos Vmax e KM. Os resultados obtidos mostraram que todos os compostos utilizados inibem a atividade da NDH-2, apresentando os seguintes valores de IC50: PR (1,4 μM), CFZ (1,9 μM), FPX (2,8 μM), TZ (8,1 μM), U4 (46,5 μM) e VP (91,8 μM). Assim sendo, os três primeiros compostos parecem mais promissores na terapêutica antimicobacteriana. Relativamente ao estudo cinético efetuado para o substrato NADH foi possível determinar o valor de Vmax (1,3 μmol min-1) e KM (61,9 μM) para a NDH-2 em ambiente membranar, na ausência de inibidor.