Obtenção de células competentes de Paenibacillus elgii AC13

• Autor(a) principal: Amorim, Gabriella Cavalcante
• Data de Publicação: 2019
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UCB
• Texto Completo: https://repositorio.ucb.br:9443/jspui/handle/123456789/12865
• topic: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS; Paenibacillus; Células competentes; Resistência antimicrobiana

Paenibacillus é um gênero bacteriano que produz muitas moléculas bioativas, como antimicrobianos, enzimas e promotores de crescimento de plantas. Poucas espécies deste gênero foram geneticamente manipuladas para fins biotecnológicos. No presente trabalho, utilizamos o Paenibacillus elgii AC13, que apresenta atividade antimicrobiana, principalmente devido à produção de lipopeptídeos pela síntese não ribossomal. No entanto, não existem protocolos para a manipulação genética de Paenibacillus elgii. O objetivo do presente trabalho foi obter células competentes de P. elgii AC13 para transformação genética. Primeiramente, foi necessário obter marcadores de seleção para os transformantes, uma vez que esta espécie é naturalmente resistente a vários antibióticos. Neste estudo, a ampicilina, canamicina e cloranfenicol foram testados em diferentes concentrações. Dois protocolos foram então comparados para obter células eletrocompetentes para transformação. Ambos os protocolos foram otimizados e variáveis como: densidade óptica, meio de cultura, condições de incubação e solução de lavagem foram sistematicamente testadas. Os plasmídeos utilizados foram pUC19 e pAD123. A preparação destes plasmídeos foi realizada por transformação celular de Escherichia coli XL1 blue e ER2925, respectivamente. De acordo com os dados obtidos, a utilização do antibiótico canamicina é inviável como antibiótico marcador. Já os antibióticos cloranfenicol e ampicilina, demostraram o mesmo resultado e portanto, possuem o mesmo potencial de uso como antibiótico marcador. Inicialmente foi possível obter transformantes de P. elgii AC13 a partir de um dos protocolos de eletrotransformação, mas eles não foram estáveis em culturas subsequentes. Ainda é necessário realizar testes de triagem para confirmar que o plasmídeo usado na transformação foi realmente incorporado.