Caracterização de Staphylococcus spp. isolados de leite caprino no Estado da Paraíba.

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: FREIRE, Daneelly Henrique Ferreira.
Data de Publicação: 2021
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFCG
Texto Completo: http://dspace.sti.ufcg.edu.br:8080/jspui/handle/riufcg/25788
Resumo: A principal enfermidade que acomete o rebanho leiteiro caprino são infecções intramamárias, que geralmente tem como etiologia Staphylococcus coagulase negativos (SCN) e positivo (SCP). Nesse sentido, o presente estudo teve como objetivo a caracterização genotípica e fenotípica de Staphylococcus isolados de mastite subclínica de caprinos bem como caracterizar os fatores de virulência associados a essas bactérias. Foram coletadas 400 amostras de leite caprino em 25 propriedades distribuídas em cinco municípios da Paraíba, (Amparo, Cabaceiras, São Sebastião de Umbuzeiro, Ouro Velho e Prata) que possuem rebanho caprino leiteiro, resultando em 105 isolamentos característicos de Staphylococcus spp., as espécies foram identificadas por Maldi-tof. Foram realizadas PCR individuais objetivando identificar genes de enterotoxinas sea, seb, sec, sed, see, seg, seh e sei e genes de resistência blaZ e mecA, amostras hemolíticas foram testadas para IcaD. O teste de sensibilidade antimicrobiana fenotípica foi realizada através da técnica de disco difusão. Foram utilizados os seguintes discos: Cefoxitina 30μg, Oxacilina 1μg, Gentamicina 10μg, Eritromicina 15μg, Tetraciclina 30μg, Ciprofloxacino 5μg, Sulfa/Trimetropim 25μg, Clindamicina 2μg, Penicilina 10U, Clorafenicol 30μg. Foi realizado o teste exato de Fisher (p>0,05) para comprar espécies e resistência. A genotipificação dos isolados foi elaborada empregando a REPPCR, utilizando o primer RW3A, as imagens foram processadas pelo software BioNumerics©, o grau de similaridade foi estabelecido por meio do coeficiente de Jaccard (5%). Um total de 15 espécies de Staphylococcus foi identificado nos cinco municípios avaliados. As principais espécies causadoras de mastite subclínica foram S. epidermidis (36%), S. caprae (24%), S. lugdunensis (13%), S. simulans (7%) e S. xylosus (4%). O município que apresentou a maior diversidade de espécies foi o de Prata. A REPPCR identificou 28 perfis com similaridade de 100%, observou-se que espécies bacterianas genotipicamente clones (100% de similaridade) são responsáveis pela mastite subclínica em cidades diferentes. A presença de genes de enterotoxinas foram identificados em oito Staphylococcus (7,6%), destes três apresentaram sec e cinco seh, três amostras apresentaram o gene sec e seh simultaneamente. Altas taxas de resistências foram identificados para Penicilina (40%), Sufa/Trimetropim (33%) e Tetraciclina (25,5%). Três estirpes de SCN apresentaram resistência fenotípica a oxacilina caracterizando MRSCN e uma linhagem de S. aureus (MRSA). Todas as amostras foram sensíveis a Gentamicina. Na investigação do perfil genotípico de resistência foi revelado isolados positivas para o gene blaZ (26,6%) e mecA (1,1%). Os isolados hemolíticos testados para icaD (50%), foram considerados como potenciais produtores de biofilme pela detecção do gene. Considerando a caracterização dos principais agentes bacterianos causadores de mastite e seus fatores de virulência e resistência, norteiam o papel da cadeia leiteira alimentar caprina como reservatórios de patógenos que geram riscos a saúde pública, as altas taxas de resistência e identificação de cepas produtoras de biofilme indicam falhas nas práticas terapêuticas e de manejo.
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Nesse sentido, o presente estudo teve como objetivo a caracterização genotípica e fenotípica de Staphylococcus isolados de mastite subclínica de caprinos bem como caracterizar os fatores de virulência associados a essas bactérias. Foram coletadas 400 amostras de leite caprino em 25 propriedades distribuídas em cinco municípios da Paraíba, (Amparo, Cabaceiras, São Sebastião de Umbuzeiro, Ouro Velho e Prata) que possuem rebanho caprino leiteiro, resultando em 105 isolamentos característicos de Staphylococcus spp., as espécies foram identificadas por Maldi-tof. Foram realizadas PCR individuais objetivando identificar genes de enterotoxinas sea, seb, sec, sed, see, seg, seh e sei e genes de resistência blaZ e mecA, amostras hemolíticas foram testadas para IcaD. O teste de sensibilidade antimicrobiana fenotípica foi realizada através da técnica de disco difusão. Foram utilizados os seguintes discos: Cefoxitina 30μg, Oxacilina 1μg, Gentamicina 10μg, Eritromicina 15μg, Tetraciclina 30μg, Ciprofloxacino 5μg, Sulfa/Trimetropim 25μg, Clindamicina 2μg, Penicilina 10U, Clorafenicol 30μg. Foi realizado o teste exato de Fisher (p>0,05) para comprar espécies e resistência. A genotipificação dos isolados foi elaborada empregando a REPPCR, utilizando o primer RW3A, as imagens foram processadas pelo software BioNumerics©, o grau de similaridade foi estabelecido por meio do coeficiente de Jaccard (5%). Um total de 15 espécies de Staphylococcus foi identificado nos cinco municípios avaliados. As principais espécies causadoras de mastite subclínica foram S. epidermidis (36%), S. caprae (24%), S. lugdunensis (13%), S. simulans (7%) e S. xylosus (4%). O município que apresentou a maior diversidade de espécies foi o de Prata. A REPPCR identificou 28 perfis com similaridade de 100%, observou-se que espécies bacterianas genotipicamente clones (100% de similaridade) são responsáveis pela mastite subclínica em cidades diferentes. A presença de genes de enterotoxinas foram identificados em oito Staphylococcus (7,6%), destes três apresentaram sec e cinco seh, três amostras apresentaram o gene sec e seh simultaneamente. Altas taxas de resistências foram identificados para Penicilina (40%), Sufa/Trimetropim (33%) e Tetraciclina (25,5%). Três estirpes de SCN apresentaram resistência fenotípica a oxacilina caracterizando MRSCN e uma linhagem de S. aureus (MRSA). Todas as amostras foram sensíveis a Gentamicina. Na investigação do perfil genotípico de resistência foi revelado isolados positivas para o gene blaZ (26,6%) e mecA (1,1%). Os isolados hemolíticos testados para icaD (50%), foram considerados como potenciais produtores de biofilme pela detecção do gene. Considerando a caracterização dos principais agentes bacterianos causadores de mastite e seus fatores de virulência e resistência, norteiam o papel da cadeia leiteira alimentar caprina como reservatórios de patógenos que geram riscos a saúde pública, as altas taxas de resistência e identificação de cepas produtoras de biofilme indicam falhas nas práticas terapêuticas e de manejo.The main disease that affects the goat dairy herd is intramammary infections, which usually have coagulase negative (SCN) and positive (SCP) Staphylococcus etiology. In this north, the present study aimed at the genotypic and phenotypic characterization of Staphylococcus isolated from subclinical goat mastitis as well as to characterize the virulence factors associated with these bacteria. 400 goat milk samples were collected from 25 farms distributed in five municipalities in Paraíba that have a dairy goat herd, resulting in 105 isolations characteristic of Staphylococcus spp., The species were identified by Malditof. The genotyping of the isolates was performed using REPPCR, using the primer RW3A, the images were processed by the software BioNumerics ©, the degree of similarity was established using the Jaccard coefficient (5%). Individual PCRs were carried out aiming to identify sea, seb, sec, sed, see, sec, seh and sei enterotoxin genes and blaZ and mecA resistance genes, hemolytic samples were tested for IcaD. The reactions had a final volume of 50μL, PCR SuperMix (Invitrogen, Brazil) was used with 0.4 mM of each primer. The determination of phenotypic resistance was performed using the disk diffusion technique. The following discs were used: Cefoxitin 30μg, Oxacillin 1μg, Gentamicin 10μg, Erythromycin 15μg, Tetracycline 30μg, Ciprofloxacin 5μg, Sulfa / Trimetropim 25μg, Clindamycin 2μg, Penicillin 10U, Clorafenicol 30μg. Fisher's exact test (p >0,05) was performed to buy species and resistance. A total of 15 species of Staphylococcus were identified in the five municipalities evaluated. The main species causing subclinical mastitis were S. epidermidis (36%), S. caprae (24%), S. lugdunensis (13%), S. simulans (7%) and S. xylosus (4%). The municipality that presented the greatest diversity of species was Prata. REPPCR identified 28 profiles with 100% similarity, it was observed that bacterial species genotypically clones (100% similarity) are responsible for subclinical mastitis in different cities. The presence of enterotoxin genes was identified in eight Staphylococcus (7.6%), of these three presented sec and five seh, three samples presented the sec and seh gene simultaneously. High resistance rates have been identified for Penicillin (40%), Sufa / Trimetropim (33%) and Tetracycline (25.5%). Three strains of SCN showed phenotypic resistance to oxacillin characterizing MRSCN and a strain of S. aureus (MRSA). All samples were sensitive to Gentamicin. In the investigation of the genotypic resistance profile, positive isolates for the blaZ (26.6%) and mecA (1.1%) genes were revealed. Hemolytic isolates tested for icaD (50%), biofilm production capacity was observed. Considering the characterization of the main bacterial agents that cause mastitis and its virulence and resistance factors, they guide the role of the goat food chain as reservoirs of pathogens that generate public health risks, the high rates of resistance and identification of biofilm producing strains indicate flaws in therapeutic practices.Universidade Federal de Campina GrandeBrasilCentro de Saúde e Tecnologia Rural - CSTRPROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIA E SAÚDE ANIMALUFCGMELO, Márcia Almeida de.MELO, M. A.http://lattes.cnpq.br/1896514405880465OLIVEIRA, Celso José Bruno de.OLIVEIRA, C. J. B.http://lattes.cnpq.br/1085810832851989MEDEIROS, Rosália Severo de.MEDEIROS, R. S.AZEVEDO, Edisio Oliveira de.AZEVEDO, E. O.OLIVEIRA FILHO, Abrahão Alves de.OLIVEIRA FILHO, A. A.MEDEIROS, Nara Geanne de Araújo.MEDEIROS, N. G. A.FREIRE, Daneelly Henrique Ferreira.2021-02-262022-06-15T21:32:38Z2022-06-152022-06-15T21:32:38Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesishttp://dspace.sti.ufcg.edu.br:8080/jspui/handle/riufcg/25788FREIRE, Daneelly Henrique Ferreira. Caracterização de Staphylococcus spp. isolados de leite caprino no Estado da Paraíba. 2021. 48f. (Tese de Doutorado), Programa de Pós-Graduação em Medicina Veterinária, Centro de Saúde e Tecnologia Rural, Universidade Federal de Campina Grande - Patos - Paraíba - Brasil, 2021. 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Leite caprino - microbiologia
Avaliação microbiológica - leite de cabras
Leite de cabras - Staphylococcus spp
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Caprinocultura leiteira
Enterotoxinas
Coagulase negativo
Genotipagem
Infecções intramamárias - caprinos
Mastite subclínica - caprinos
Cariri Paraibano - caprinocultura leiteira
Amparo - PB - caprinocultura leiteira
Cabaceiras - PB - caprinocultura leiteira
São Sebastião de Umbuzeiro - PB - caprinocultura leiteira
Ouro Velho - PB - caprinocultura leiteira
Prata - PB - caprinocultura leiteira
Software BioNumerics©
Goat milk - microbiology
Microbiological evaluation - goat milk
Goat milk - Staphylococcus spp
Dairy goat farming
Enterotoxins
Negative coagulase
Genotyping
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Subclinical mastitis - goats
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Medicina Veterinária
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AZEVEDO, Edisio Oliveira de.
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