As trans-sialidases de Trypanosoma cruzi como fatores de virulência e alvos para o desenvolvimento de vacinas para doença de Chagas.
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Data de Publicação: | 2023 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UFMG |
Texto Completo: | http://hdl.handle.net/1843/55874 |
Resumo: | As trans-sialidases (TS) são proteínas presentes na superfície do Trypanosoma cruzi, codificadas por uma família multigênica e altamente variável. Somente um sub-grupo das TS possui atividade catalítica, responsável por transferir resíduos de ácido siálico de glicoconjugados do hospedeiro para mucinas na superfície do parasito, um mecanismo relacionado à capacidade de evasão do parasito ao sistema imune do hospedeiro. Algumas TS possuem um domínio na porção C-terminal da proteína contendo repetições de 12 aminoácidos denominadas SAPA (shed acute parasite antigen). Além de ser altamente imunogênico, o domínio SAPA aumenta a estabilidade da enzima na corrente sanguínea, sendo considerado um fator de virulência do parasito. No presente trabalho, a sequência de uma TS ativa contendo ou não repetições SAPA foi avaliada como candidata vacinal para duas estratégias de vacinas: com proteína recombinante e vacina de RNA. Três versões da proteína recombinante foram produzidas em E. coli: a proteína completa (TS completa), a proteína sem as repetições (TS sem SAPA) e a proteína contendo somente as repetições SAPA (TS-SAPA). Camundongos BALB/c foram imunizados com as proteínas e desafiados com uma cepa virulenta de T. cruzi. Análises da resposta imune celular mostraram que a imunização com a TS sem SAPA resultou em maiores níveis de IFN-γ e menores níveis de IL-10 produzidos pelos esplenócitos dos animais em comparação com esplenócitos dos animais imunizados com a TS completa, ou com a proteína contendo somente as repetições SAPA. Além disso, após o desafio, a imunização dos animais com a proteína contendo somente as repetições SAPA resultou em maior parasitemia e mortalidade, comparada à imunização com a TS sem SAPA. Importante ressaltar que os tecidos dos animais imunizados com a TS sem SAPA não exibiram infiltrado inflamatório nem níveis detectáveis de DNA do parasito no coração. Portanto, esses resultados indicam que a imunização com a TS sem repetições SAPA é a melhor opção para induzir o desenvolvimento de uma resposta Th1 protetora, essencial para o controle da infecção por patógenos intracelulares, e que a presença de repetições SAPA resulta em uma modulação negativa dessa resposta protetora. Visto que as vacinas de RNA apresentam diversas vantagens na imunização e a TS sem SAPA se apresentou como antígeno promissor para um modelo vacinal contra a doença de Chagas, o mRNA dessa proteína foi produzido e testado em uma formulação lipídica para imunizar animais em experimentos futuros. |
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Santuza Maria Ribeiro Teixeirahttp://lattes.cnpq.br/1441035148021341Nailma Silva Aprigio dos SantosFabiana Simão MachadoWalderez Ornelas Dutrahttp://lattes.cnpq.br/0563688970510718Carlos Roberto de Almeida Júnior2023-07-06T15:25:26Z2023-07-06T15:25:26Z2023-06-06http://hdl.handle.net/1843/55874As trans-sialidases (TS) são proteínas presentes na superfície do Trypanosoma cruzi, codificadas por uma família multigênica e altamente variável. Somente um sub-grupo das TS possui atividade catalítica, responsável por transferir resíduos de ácido siálico de glicoconjugados do hospedeiro para mucinas na superfície do parasito, um mecanismo relacionado à capacidade de evasão do parasito ao sistema imune do hospedeiro. Algumas TS possuem um domínio na porção C-terminal da proteína contendo repetições de 12 aminoácidos denominadas SAPA (shed acute parasite antigen). Além de ser altamente imunogênico, o domínio SAPA aumenta a estabilidade da enzima na corrente sanguínea, sendo considerado um fator de virulência do parasito. No presente trabalho, a sequência de uma TS ativa contendo ou não repetições SAPA foi avaliada como candidata vacinal para duas estratégias de vacinas: com proteína recombinante e vacina de RNA. Três versões da proteína recombinante foram produzidas em E. coli: a proteína completa (TS completa), a proteína sem as repetições (TS sem SAPA) e a proteína contendo somente as repetições SAPA (TS-SAPA). Camundongos BALB/c foram imunizados com as proteínas e desafiados com uma cepa virulenta de T. cruzi. Análises da resposta imune celular mostraram que a imunização com a TS sem SAPA resultou em maiores níveis de IFN-γ e menores níveis de IL-10 produzidos pelos esplenócitos dos animais em comparação com esplenócitos dos animais imunizados com a TS completa, ou com a proteína contendo somente as repetições SAPA. Além disso, após o desafio, a imunização dos animais com a proteína contendo somente as repetições SAPA resultou em maior parasitemia e mortalidade, comparada à imunização com a TS sem SAPA. Importante ressaltar que os tecidos dos animais imunizados com a TS sem SAPA não exibiram infiltrado inflamatório nem níveis detectáveis de DNA do parasito no coração. Portanto, esses resultados indicam que a imunização com a TS sem repetições SAPA é a melhor opção para induzir o desenvolvimento de uma resposta Th1 protetora, essencial para o controle da infecção por patógenos intracelulares, e que a presença de repetições SAPA resulta em uma modulação negativa dessa resposta protetora. Visto que as vacinas de RNA apresentam diversas vantagens na imunização e a TS sem SAPA se apresentou como antígeno promissor para um modelo vacinal contra a doença de Chagas, o mRNA dessa proteína foi produzido e testado em uma formulação lipídica para imunizar animais em experimentos futuros.Trans-sialidases (TS) are proteins present on the surface of Trypanosoma cruzi, encoded by a multigenic and highly variable family. Only a subgroup of TS has catalytic activity, responsible for transferring sialic acid residues from host glycoconjugates to mucins on the parasite surface, a mechanism that is related to the parasite capacity to evade the host immune system. Some TS have a C-terminal domain containing 12 amino acids repeats known as SAPA (shed acute parasite antigen). In addition to being highly immunogenic, the SAPA domain increases the stability of the enzyme in the bloodstream, which is considered a parasite virulence factor. In this study, sequences of an active TS containing or not SAPA repeats were evaluated as vaccine candidates for two vaccine strategies: immunization with recombinant protein and RNA vaccine. Three recombinant versions of the protein were produced in E. coli: the full-length protein (full-length TS), TS without repeats (TS without SAPA), and only SAPA repeats (TS-SAPA). BALB/c mice were immunized with each protein and subsequently challenged with a virulent strain of T. cruzi. Analyzes of the cellular immune response showed that immunization with TS without SAPA resulted in higher levels of IFN-γ and lower levels of IL-10 produced by splenocytes from animals, compared to splenocytes from animals immunized with full-length TS or protein containing only SAPA repeats. Furthermore, after challenge, mice immunized with protein containing only SAPA repeats resulted in higher parasitemia and mortality compared to immunization with TS without SAPA. It is important to emphasize that tissues of animals immunized with TS without SAPA did not show inflammatory infiltrate or detectable levels of parasite DNA in the heart. Taken together these results indicated that immunization with TS antigen without SAPA repeats is the best option to induce the development of a protective Th1 response, essential for intracellular pathogen infection control, and that the presence of SAPA repeats results in the negative modulation of this protective response. Since RNA vaccines have several advantages in immunization protocols and TS without SAPA is a promising antigen for a vaccine model against Chagas disease, the mRNA of this protein was produced and tested in a lipid formulation for immunization of animals in future experiments.CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível SuperiorporUniversidade Federal de Minas GeraisPrograma de Pós-Graduação em Bioquímica e ImunologiaUFMGBrasilICB - DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA E IMUNOLOGIABioquímica e ImunologiaDoença de ChagasTrypanosoma cruziNeuraminidaseVacinasTrans-sialidaseRepetições SAPAT. cruziAs trans-sialidases de Trypanosoma cruzi como fatores de virulência e alvos para o desenvolvimento de vacinas para doença de Chagas.Trypanosoma cruzi trans-sialidases as virulence factors and targets for the development of vaccines for Chagas disease.info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGORIGINALDISSERTAÇÃO 2023 VERSÃO REPOSITÓRIO.pdfDISSERTAÇÃO 2023 VERSÃO REPOSITÓRIO.pdfapplication/pdf5002746https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/55874/3/DISSERTA%c3%87%c3%83O%202023%20VERS%c3%83O%20REPOSIT%c3%93RIO.pdf8bf67366881a75edfeb9ba89ecb1ff19MD53LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-82118https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/55874/4/license.txtcda590c95a0b51b4d15f60c9642ca272MD541843/558742023-07-06 12:25:26.483oai:repositorio.ufmg.br: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ório de PublicaçõesPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2023-07-06T15:25:26Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false |
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