Clonagem e caracaterização funcional do gene da DNA polimerase de trypanosma cruzi
Autor(a) principal: | |
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Data de Publicação: | 2008 |
Tipo de documento: | Tese |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UFMG |
Texto Completo: | http://hdl.handle.net/1843/CMFC-7LLNXY |
Resumo: | As células são constantemente expostas a diversos agentes de origem endógena ou exógena que causam lesões no DNA. Como estas lesões podem gerar mutações ou causar a morte celular, as células desenvolveram complexos sistemas de reparo para minimizar os danos, mantendo assim, a integridade do genoma. Entretanto, muitas lesões podem escapar das proteínas envolvidas no reparo e bloquear a maquinaria de replicação. Uma das maneiras encontradas pelas células para contornar esta situação foi desenvolver um mecanismo para realizar a síntese de DNA passando por estas lesões. Esse processo, denominado de síntese translesão, é realizado por um conjunto de DNA polimerases adaptadas a esta função, as polimerases da família Y. Ao contrário da maioria das polimerases, a Pol é capaz de replicar eficientemente a fita de DNA frente a uma variedade de lesões, como dímeros de timina, sítios AP e 8-oxoG, de uma forma livre de erros. Neste trabalho, nós clonamos e caracterizamos o gene da Pol de Trypanosoma cruzi, o agente causador da doença de Chagas. O gene TcPol codifica uma proteína que contém motivos que são conservados entre as polimerases da família Y. Ensaios in vitro demonstraram que a proteína recombinante é capaz de polimerizar diferentes moldes de DNA contendo ou não lesões. Apesar de complementar o fenótipo de sensibilidade à luz UV de leveduras que tiveram o gene RAD30 mutado, a superexpressão da TcPol em T. cruzi não aumentou a sobrevivência dos parasitos após tratamento com luz UV, cisplatina ou zeocina. A superexpressão também não foi capaz de promover a retomada do crescimento dos parasitos após a irradiação gama, mas aumentou a resistência destes após o tratamento com H2O2. Estes resultados sugerem que a TcPol pode ter um papel importante na síntese translesão de lesões oxidativas remanescente na fita de DNA durante a fase S, impedindo assim, o bloqueio da replicação. |
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Carlos Renato MachadoSantuza Maria Ribeiro TeixeiraFernanda Ramos GadelhaRiva de Paula OliveiraCarlos Delfin Chavez OlorteguiJenifer SaffiMichelle Barbi de Moura2019-08-12T17:37:43Z2019-08-12T17:37:43Z2008-10-24http://hdl.handle.net/1843/CMFC-7LLNXYAs células são constantemente expostas a diversos agentes de origem endógena ou exógena que causam lesões no DNA. Como estas lesões podem gerar mutações ou causar a morte celular, as células desenvolveram complexos sistemas de reparo para minimizar os danos, mantendo assim, a integridade do genoma. Entretanto, muitas lesões podem escapar das proteínas envolvidas no reparo e bloquear a maquinaria de replicação. Uma das maneiras encontradas pelas células para contornar esta situação foi desenvolver um mecanismo para realizar a síntese de DNA passando por estas lesões. Esse processo, denominado de síntese translesão, é realizado por um conjunto de DNA polimerases adaptadas a esta função, as polimerases da família Y. Ao contrário da maioria das polimerases, a Pol é capaz de replicar eficientemente a fita de DNA frente a uma variedade de lesões, como dímeros de timina, sítios AP e 8-oxoG, de uma forma livre de erros. Neste trabalho, nós clonamos e caracterizamos o gene da Pol de Trypanosoma cruzi, o agente causador da doença de Chagas. O gene TcPol codifica uma proteína que contém motivos que são conservados entre as polimerases da família Y. Ensaios in vitro demonstraram que a proteína recombinante é capaz de polimerizar diferentes moldes de DNA contendo ou não lesões. Apesar de complementar o fenótipo de sensibilidade à luz UV de leveduras que tiveram o gene RAD30 mutado, a superexpressão da TcPol em T. cruzi não aumentou a sobrevivência dos parasitos após tratamento com luz UV, cisplatina ou zeocina. A superexpressão também não foi capaz de promover a retomada do crescimento dos parasitos após a irradiação gama, mas aumentou a resistência destes após o tratamento com H2O2. Estes resultados sugerem que a TcPol pode ter um papel importante na síntese translesão de lesões oxidativas remanescente na fita de DNA durante a fase S, impedindo assim, o bloqueio da replicação.Cells are constantly exposed to endogenous or exogenous agents that cause injuries in DNA. These lesions can generate mutations or even lead to cellular death. A variety of repair mechanisms acts to maintain DNA integrity, but many lesions escape these processes leading to a replication fork blockage. To overcome this blockage, cells use a specialized group of DNA polymerases to bypass DNA lesions, restarting the replication forks and enhancing cell survival. This process is called translesion synthesis and is carried out by Y-family polymerases. Pol is member of this group and is able to bypass many type of lesions, as thymine-thymine dimer, AP sites and 8-oxoG. We report the cloning and characterization of the Pol gene (TcPol) from Trypanosoma cruzi, the causative agent of Chagas disease. This gene encodes protein containing motifs that are conserved between Y-family polymerases. In vitro assays showed that the recombinant protein is capable of synthesizing DNA in damage or undamaged primer-templates. Intriguingly, overexpression of TcPol does not increase resistance to UV light, cisplatin or zeocin, despite its ability to enhance UV resistance in a RAD30 mutant of Saccharomyces cerevisiae. T. cruzi overexpressing TcPol is also unable to restore growth after gamma irradiation, but T. cruzi cells overexpressing Pol are more resistant to treatment with hydrogen peroxide (H2O2). The results presented here suggest that TcPol plays an important role in the bypass of oxidative remanescent in DNA during S phase, stopping replication blockage.Universidade Federal de Minas GeraisUFMGBioquímicaTripanossoma cruziTRYPANOSOMA CRUZIClonagem e caracaterização funcional do gene da DNA polimerase de trypanosma cruziinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGORIGINALmichele_barbi_de_moura_resumo.dout.pdfapplication/pdf25246https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/CMFC-7LLNXY/1/michele_barbi_de_moura_resumo.dout.pdf9fef1a6f10c548aed8668b4e3745baf6MD51TEXTmichele_barbi_de_moura_resumo.dout.pdf.txtmichele_barbi_de_moura_resumo.dout.pdf.txtExtracted texttext/plain3756https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/CMFC-7LLNXY/2/michele_barbi_de_moura_resumo.dout.pdf.txtc1d703fa388e691fac9dcb8571e38c29MD521843/CMFC-7LLNXY2019-11-14 19:01:19.568oai:repositorio.ufmg.br:1843/CMFC-7LLNXYRepositório de PublicaçõesPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2019-11-14T22:01:19Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false |
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