Análise dos efeitos de RAP2A sobre a ativação do fator de transcrição NF-kappaB na via de sinalização celular dos receptores do tipo Toll (TLRs)

• Autor(a) principal: Brener Cunha Carvalho
• Data de Publicação: 2014
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/33875
• topic: Biologia Celular; Biologia Celular; Receptores Toll-Like; NF-kappa B; Proteínas ras

O reconhecimento de patógenos, um evento essencial para o início das respostas do sistema imune inato, é mediado por receptores de reconhecimento padrão (PRRs) como os receptores do tipo toll (TLRs). A sinalização celular disparada por meio dos TLRs leva à ativação de vários fatores de transcrição, que por sua vez participam da regulação de genes relacionados à resposta inflamatória. Um fator de transcrição central nesse contexto é o NF-kappaB, que precisa ser devidamente modulado por diversos mecanismos, pois a sua desregulação desempenha um papel fundamental em diversas patologias. Portanto, o melhor entendimento dos mecanismos de modulação de NF-κB pode fornecer novas abordagens terapêuticas para diversas doenças. RAP2A pertence à superfamília Ras, um grupo de proteínas envolvidas em diversos processos celulares e que têm sua atividade regulada por moléculas denominadas GEFs e GAPs. Estudos desenvolvidos em nosso laboratório demonstram que um GEF denominado RasGEF1B é codificado por um gene de expressão induzida por agonistas TLRs e apresenta um papel regulador negativo sobre a ativação de NF-κB mediada por TLRs (Andrade et al, 2010; Rocha, 2014). Em 2009, Yaman e colaboradores (Yaman et al, 2009) descreveram RAP2A como uma molécula efetora de RasGEF1B. Assim, hipotetizamos que, por ser efetor de RasGEF1B, RAP2A também desempenhe uma função regulatória importante sobre a atividade de NF-κB. Logo, o objetivo principal desse trabalho foi avaliar o efeito de RAP2A sobre a regulação da ativação de NF-κB na via de sinalização celular disparada por TLRs. Primeiramente, determinamos por meio de PCR o perfil de expressão de RAP2A em resposta à estimulação com agonistas de TLRs em linhagens de macrófagos murinos e monócitos humanos. Interessantemente, os níveis de RAP2A já se encontram elevados nas células não-estimuladas, porém são drasticamente reduzidos logo após a estimulação com agonistas TLRs. A partir de estudos de transfecção e ensaios de gene repórter, mostramos que a superexpressão de RAP2A inibe a ativação de NF-κB induzida por diversas moléculas como TNF, proteínas da via de sinalização dos TLRs e agonistas de TLRs, exceto pelo agonista de TLR3. Nossos dados suportam a ideia que RAP2A seja uma molécula importante que contribua para a regulação da ativação de NF-κB na resposta imune mediada pelos TLRs, e que a redução de sua expressão logo após a exposição das células a agonistas inflamatórios seja um evento crítico para permitir que a ativação de NF-κB seja bem sucedida