Efeito protetor de L. diolivorans 1Z isolado de grãos de kefir na infecção experimental com Salmonella enterica subsp. enterica sorovar Typhimurium em modelo murino

• Autor(a) principal: Mário Abatemarco Júnior
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/42333
• topic: Kefir; Grãos de kefir; Lactobacillus; Probiótico; Microbiologia; Kefir; Lactobacillus; Probióticos

Kefir é uma bebida fermentada, ácida, levemente alcoólica, obtida pela dupla fermentação (alcoólica e ácido-lática) do leite pelas BAL e leveduras presentes nos grãos de kefir. A microbiota dos grãos é composta principalmente por bactérias do ácido lático e leveduras, sendo que o gênero Lactobacillus perfaz aproximadamente 90% da microbiota dos grãos. Vários efeitos benéficos têm sido atribuídos à ingestão do kefir, como por exemplo, melhora da intolerância a lactose, efeito hipocolesterolêmico, entre outros. Parte desses efeitos benéficos pode ser atribuído aosLactobacillus, o que faz dos grãos uma fonte de microrganismos com potencial probiótico. Assim sendo, o objetivo desse trabalho foi avaliar o potencial probiótico de Lactobacillusdiolivorans 1Z, isolado de grãos de kefir. Cinco amostras de Lactobacillus (L. satsumensis 18P, L. kefiranofaciens 8U, L. casei 25P, L. perolens 17P2 e L. diolivorans 1Z) isolados de grãos cultivados em leite ou em água açucarada e previamente caracterizadas como potenciais probióticos por ensaios in vitro, foram submetidas a um ensaio para avaliar a taxa de sobrevivência e variação de peso em camundongosconvencionais, tratados ou não, e desafiados oralmente com SalmonellaTyphimurium. A administração oral diária de cultura liofilizada de L. diolivorans 1Z resultou em sobrevivência de 70% dos animais após o desafio com o patógeno e ganho de peso durante todo o período avaliado. Animais isentos de germes foram monoassociados com L.diolivorans 1Z por dose única oral de 108 UFC do microrganismo liofilizado e após sete dias de monoassociação foram desafiados oralmente com S. Typhimurium (grupo PS). Grupos de animais foram sacrificados nos tempos dois, quatro, seis e oito dias após a infecção, sendo que para cada dia, um grupo controle de animais não monoassociadoscom olactobacilo e desafiado pelo patógeno também foi sacrificado (grupo CS). Nesses mesmos tempos, grupos de animais monoassociados e não desafiados também foram sacrificados (grupo CP). Foram retirados dos animais íleo e fígado, para análise histopatológica, morfométrica e detecção de citocinas pró e anti-inflamatórias; fezes para avaliação do antagonismo in vivo e ex vivo; fígado e baço para avaliação da translocação da salmonela e fluido intestinal para detecção de sIgA. A administração de L. diolivorans 1Z não induziu alterações patológicas na mucosa ileal e hepática, não aumentou a expressão de citocinas pró-inflamatórias no íleo e fígado (P>0,05) e aumentou os títulos de sIgA (P<0,05) quando comparadas ao grupo controle isento de germe (grupo GF). A contagem de salmonela nas fezes dos animais PS foi estatisticamente menor a partir do quarto dia de infecção quando comparado com o grupo CS (P<0,05). A análise histopatológica revelou menor dano àmucosaileal, comprovada pelo menor perímetro de lesões graves atribuídas à infecçãonos animais do grupo PS em relação ao grupo CS (P<0,05) no oitavo dia de infecção. Esses achados foram acompanhados poruma menor expressão das citocinas pró-inflamatórias IFN-γ e TNF-α no tecido intestinal. A contagem de salmonela no fígado dos animais PS foi menor em relação ao grupo CS (P<0,05), alcançando níveis indetectáveis após o sexto dia de infecção o que poderia ser explicado pelo aumento da secreção de sIgA no conteúdo intestinal e por um aparente aumento do número de células de Küpffer no grupo PS.No fígado, a expressão das citocinas pró-inflamatórias IFN-γ, TNF-α, IL1-β e da enzima iNOS e anti-inflamatórias IL-10 e TGF-β aumentou de maneira progressiva ao longo dos dias de infecção nos grupos PS e CS. Comparando os dois grupos, uma tendência à diminuição da expressão das citocinas pró-inflamatórias e aumento das anti-inflamatórias foi observada no grupo PS em relação ao grupo CS (P>0,05). Não foram detectadas diferenças no número de núcleos/mm2no fígado entre os grupos PS e CS (P>0,05) o que indica que o tratamento com L. diolivorans 1Z não foi capaz de diminuir o infiltrado inflamatório para o referido órgão. No entanto, a análise qualitativa das lâminas de fígado coradas em HE, revelou que o perfil de células inflamatórias presentes no fígado dos animais do grupo CS foi predominantemente polimorfonuclear, enquanto no grupo PSfoipredominantementemononuclear.,Como consequência, a resposta inflamatória no fígado dos animais do grupo PS foi mais rápida e eficiente para a diminuição da contagem de S. Typhimurium no órgão. Os resultados desse trabalho sugerem que L. diolivorans 1Z é uma linhagem potencialmente probiótica, segura e capaz de proteger da morte animais desafiados por S. Typhimurium, aparentemente por mecanismos imunológicos que merecem ser aprofundados em trabalhos futuros.