Estudo morfofuncional comparativo de fibroblastos sinoviais de pacientes com artrite reumatóide e de modelo experimental de artrite induzida por colágeno

• Autor(a) principal: Rafaela Bicalho Viana Macedo
• Data de Publicação: 2013
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-9UHNN5
• topic: Cultura de células; Artrite induzida por colágeno; Interleucina 33; Morfologia; sinovial; Microscopia eletrônica; Artrite reumatoide; Fibroblasto; Células cultivadas; Fibroblastos/efeitos de drogas; Reumatologia; Artrite reumatóide/fisiopatologia; Artrite experimental; Artrite reumatóide/terapia; Interleucina; Artrite reumatoide; Terapia biológica; Artrite

A fisiopatologia da artrite reumatoide (AR) envolve a participação de diversas células e citocinas. A interleucina 33 (IL-33) é um membro recentemente descrito da família da interleucina 1 (IL-1) e seu papel no desenvolvimento e perpetuação da resposta inflamatória vem sendo demonstrado em diversos estudos em pacientes com AR e em modelos experimentais. Na membrana sinovial, fibroblastos sinoviais (FS) assumem comportamento crucial no processo inflamatório da AR estando implicadas na patogênese da sinovite e do dano estrutural, através da produção de citocinas inflamatórias e metaloproteinases (MMPs). Comparar a morfologia de FS do líquido articular e do tecido sinovial de pacientes com AR com FS obtidos de modelo experimental de artrite induzida pelo colágeno (CIA) por microscopia óptica e eletrônica. Estudar o efeito do estímulo com IL-33 sobre essas células quanto à produção de interleucina-6 (IL-6) e MMPs 1 e 3. Adicionalmente avaliar a produção de MMPs 1 e 3 após estímulo com fator de necrose tumoral alfa (TNF-alfa) e interleucina 1 beta (IL-1 beta). Estabeleceu-se protocolo de cultivo de fibroblastos de sinóvia e líquido sinovial de pacientes com AR e de camundongos com CIA. Foram utilizadas células humanas entre a quarta e oitava passagens e células de modelo de CIA entre 27ª e 38ª passagens. As células foram comparadas morfologicamente por microscopia óptica e eletrônica de transmissão (MET) e varredura (MEV). As concentrações basais de IL-6 foram avaliadas nos FS humanos e murinos. Os FS de modelo de CIA foram estimulados por 18 horas com IL-33 nas doses de 1, 3, 10, 30 e 100ng/mL e a produção de TNF-alfa e IL-6 foi identificada pela técnica de ELISA. FS humanos receberam estímulo com IL-33 10ng/mL e as concentrações de IL-6 foram dosadas após 1, 3, 6, 9, 12 e 24 horas. FS humanos também foram estimulados com TNF-alfa e IL-1b nas doses 0,5; 1, 5 e 10 ng/mL cada um isoladamente por 18 horas e a produção de MMP 1 e 3 foi analisada por ELISA. FS humanos e murinos exibiram morfologia ultraestrutural semelhante, com citoplasma abundante e presença de corpúsculos lamelares. No modelo de CIA a produção basal média de IL-6 foi de 73,94 (± 4,0) ng/mL e após estímulo com IL-33 houve aumento na produção de IL-6 com doses crescentes de IL-33. Não foi detectado nível de TNF-alfa basal ou após estímulo com IL-33. Nas células humanas, as concentrações de MMP-1 se correlacionaram positivamente com as doses crescentes de TNF-alfa e IL-1 beta. As concentrações de MMP-3 ultrapassaram os limites de detecção do método. FS humanos de pacientes com AR e do modelo de CIA exibem características morfológicas semelhantes, dando suporte ao uso do modelo animal para o estudo da doença. A análise por MET e MEV permitiram a caracterização dos FS, uma vez que os corpúsculos lamelares constituem organelas armazenadoras de surfactante presentes exclusivamente em FS da camada sinovial interna. O comportamento dos FS murinos em resposta ao estímulo com IL-33 confirmam a participação dessa citocina no ambiente inflamatório da CIA e podem ter implicações no estudo e desenvolvimento de alvos terapêuticos.