Estudo funcional in vitro de fibroblastos sinoviais de pacientes com artrite reumatoide, osteoartrite e grupo controle após estimulação com diferentes concentrações de TNF-alfa, Interleucina-1beta e Interleucina-33

• Autor(a) principal: Camilla Ribeiro Lima Machado
• Data de Publicação: 2015
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-AMLQK7
• topic: Fisiopatologia; Fibroblastos; Cultura de células; Osteoartrite; Sinalização intracelular; Artrite reumatoide; Membrana sinovial; Artrite reumatóide; Cultura de células; Fibroblastos; Osteoartrite; Interleucina; Medicina

Introdução: Artrite reumatoide e osteoartrite são doenças crônicas que se manifestam por alterações articulares inflamatórias, estruturais e funcionais. No ambiente sinovial, os fibroblastos sinoviais estão implicados no ciclo sinovite-dano estrutural, através da produçãode citocinas inflamatórias e de enzimas degradadoras de cartilagem, as metaloproteinases (MMPs). Objetivos: Avaliar a produção de IL-6, MMP-1 e MMP-3 e a ativação das vias de sinalização intracelular após estímulo por IL33, TNF-alfa e IL-1 beta em fibroblastos sinoviais de pacientes com artrite reumatoide, osteoartrite e grupo controle sem atrite.Metodologia: Fibroblastos sinoviais foram cultivados de tecido e de líquido sinovial de pacientes com artrite reumatoide, osteoartrite e grupo controle sem atrite. Após 22 horas de estímulo com TNF-alfa 1; 5; 10 e 50 ng/ml, IL-1beta 0,1; 0,2; 0,3; 0,5 e 1 ng/ml e IL-33 1; 3; 10; 30; 100 ng/ml, procedeu-se dosagens de IL-6, MMP-1 e 3, por ELISA. No lisado celular as MAPKs foram avaliadas pela fosforilação quinases JNK, p38, ERK1/2 e o fator de transcrição: NF-B estimulados com TNF-alfa 10 ng/ml, IL-1beta 0,1 ng/ml e IL-33 100ng/ml por 15 e 30 minutos através da técnica de Western Blot. Resultados: As culturas de fibroblastos sinoviais de pacientes com artrite reumatoide, osteoartrite e grupo controle sem atrite não estimuladas tiveram produção basal de MMP -1,MMP-3 e IL-6, e nas células estimuladas em concentrações crescentes com os agonista TNFalfa e IL-1beta induziram a produção de MMP -1, MMP-3 e IL-6 após 22 horas. Após a estimulação por TNF-alfa e IL-1beta foi observada fosforilação de ERK1/2 e NF-kB. O estímulo com IL-33 não induziu a produção de IL-6, MMP-1 e -3 em pacientes com artrite reumatoide, osteoartrite e grupo controle sem atrite, mesmo em concentrações até 100 ng/ml. O seu discreto aumento na fosforilação de ERK1/2 e NF-B em artrite reumatoide e osteoartrite, não foi suficiente para induzir a produção de metaloproteinases e IL-6. Conclusões: Fibroblastos sinoviais exerceram papel efetor na sinovite e no dano estrutural da artrite reumatoide e osteoartrite. O comportamento dos fibroblastos sinoviais humanos em resposta ao estímulo com IL-1beta e TNF-alfa pareceu ser mediado pelas vias ERK1/2 e NFkB,representando oportunidade de estudos sobre novos alvos terapêuticos.