Estudo morfofuncional comparativo de fibroblastos sinoviais de pacientes com artrite reumatóide e de modelo experimental de artrite induzida por colágeno
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Data de Publicação: | 2013 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UFMG |
Texto Completo: | http://hdl.handle.net/1843/BUOS-9UHNN5 |
Resumo: | A fisiopatologia da artrite reumatoide (AR) envolve a participação de diversas células e citocinas. A interleucina 33 (IL-33) é um membro recentemente descrito da família da interleucina 1 (IL-1) e seu papel no desenvolvimento e perpetuação da resposta inflamatória vem sendo demonstrado em diversos estudos em pacientes com AR e em modelos experimentais. Na membrana sinovial, fibroblastos sinoviais (FS) assumem comportamento crucial no processo inflamatório da AR estando implicadas na patogênese da sinovite e do dano estrutural, através da produção de citocinas inflamatórias e metaloproteinases (MMPs). Comparar a morfologia de FS do líquido articular e do tecido sinovial de pacientes com AR com FS obtidos de modelo experimental de artrite induzida pelo colágeno (CIA) por microscopia óptica e eletrônica. Estudar o efeito do estímulo com IL-33 sobre essas células quanto à produção de interleucina-6 (IL-6) e MMPs 1 e 3. Adicionalmente avaliar a produção de MMPs 1 e 3 após estímulo com fator de necrose tumoral alfa (TNF-alfa) e interleucina 1 beta (IL-1 beta). Estabeleceu-se protocolo de cultivo de fibroblastos de sinóvia e líquido sinovial de pacientes com AR e de camundongos com CIA. Foram utilizadas células humanas entre a quarta e oitava passagens e células de modelo de CIA entre 27ª e 38ª passagens. As células foram comparadas morfologicamente por microscopia óptica e eletrônica de transmissão (MET) e varredura (MEV). As concentrações basais de IL-6 foram avaliadas nos FS humanos e murinos. Os FS de modelo de CIA foram estimulados por 18 horas com IL-33 nas doses de 1, 3, 10, 30 e 100ng/mL e a produção de TNF-alfa e IL-6 foi identificada pela técnica de ELISA. FS humanos receberam estímulo com IL-33 10ng/mL e as concentrações de IL-6 foram dosadas após 1, 3, 6, 9, 12 e 24 horas. FS humanos também foram estimulados com TNF-alfa e IL-1b nas doses 0,5; 1, 5 e 10 ng/mL cada um isoladamente por 18 horas e a produção de MMP 1 e 3 foi analisada por ELISA. FS humanos e murinos exibiram morfologia ultraestrutural semelhante, com citoplasma abundante e presença de corpúsculos lamelares. No modelo de CIA a produção basal média de IL-6 foi de 73,94 (± 4,0) ng/mL e após estímulo com IL-33 houve aumento na produção de IL-6 com doses crescentes de IL-33. Não foi detectado nível de TNF-alfa basal ou após estímulo com IL-33. Nas células humanas, as concentrações de MMP-1 se correlacionaram positivamente com as doses crescentes de TNF-alfa e IL-1 beta. As concentrações de MMP-3 ultrapassaram os limites de detecção do método. FS humanos de pacientes com AR e do modelo de CIA exibem características morfológicas semelhantes, dando suporte ao uso do modelo animal para o estudo da doença. A análise por MET e MEV permitiram a caracterização dos FS, uma vez que os corpúsculos lamelares constituem organelas armazenadoras de surfactante presentes exclusivamente em FS da camada sinovial interna. O comportamento dos FS murinos em resposta ao estímulo com IL-33 confirmam a participação dessa citocina no ambiente inflamatório da CIA e podem ter implicações no estudo e desenvolvimento de alvos terapêuticos. |
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Marcus Vinicius Melo de AndradeAdriana Maria KakehasiRafaela Bicalho Viana Macedo2019-08-13T14:51:22Z2019-08-13T14:51:22Z2013-11-25http://hdl.handle.net/1843/BUOS-9UHNN5A fisiopatologia da artrite reumatoide (AR) envolve a participação de diversas células e citocinas. A interleucina 33 (IL-33) é um membro recentemente descrito da família da interleucina 1 (IL-1) e seu papel no desenvolvimento e perpetuação da resposta inflamatória vem sendo demonstrado em diversos estudos em pacientes com AR e em modelos experimentais. Na membrana sinovial, fibroblastos sinoviais (FS) assumem comportamento crucial no processo inflamatório da AR estando implicadas na patogênese da sinovite e do dano estrutural, através da produção de citocinas inflamatórias e metaloproteinases (MMPs). Comparar a morfologia de FS do líquido articular e do tecido sinovial de pacientes com AR com FS obtidos de modelo experimental de artrite induzida pelo colágeno (CIA) por microscopia óptica e eletrônica. Estudar o efeito do estímulo com IL-33 sobre essas células quanto à produção de interleucina-6 (IL-6) e MMPs 1 e 3. Adicionalmente avaliar a produção de MMPs 1 e 3 após estímulo com fator de necrose tumoral alfa (TNF-alfa) e interleucina 1 beta (IL-1 beta). Estabeleceu-se protocolo de cultivo de fibroblastos de sinóvia e líquido sinovial de pacientes com AR e de camundongos com CIA. Foram utilizadas células humanas entre a quarta e oitava passagens e células de modelo de CIA entre 27ª e 38ª passagens. As células foram comparadas morfologicamente por microscopia óptica e eletrônica de transmissão (MET) e varredura (MEV). As concentrações basais de IL-6 foram avaliadas nos FS humanos e murinos. Os FS de modelo de CIA foram estimulados por 18 horas com IL-33 nas doses de 1, 3, 10, 30 e 100ng/mL e a produção de TNF-alfa e IL-6 foi identificada pela técnica de ELISA. FS humanos receberam estímulo com IL-33 10ng/mL e as concentrações de IL-6 foram dosadas após 1, 3, 6, 9, 12 e 24 horas. FS humanos também foram estimulados com TNF-alfa e IL-1b nas doses 0,5; 1, 5 e 10 ng/mL cada um isoladamente por 18 horas e a produção de MMP 1 e 3 foi analisada por ELISA. FS humanos e murinos exibiram morfologia ultraestrutural semelhante, com citoplasma abundante e presença de corpúsculos lamelares. No modelo de CIA a produção basal média de IL-6 foi de 73,94 (± 4,0) ng/mL e após estímulo com IL-33 houve aumento na produção de IL-6 com doses crescentes de IL-33. Não foi detectado nível de TNF-alfa basal ou após estímulo com IL-33. Nas células humanas, as concentrações de MMP-1 se correlacionaram positivamente com as doses crescentes de TNF-alfa e IL-1 beta. As concentrações de MMP-3 ultrapassaram os limites de detecção do método. FS humanos de pacientes com AR e do modelo de CIA exibem características morfológicas semelhantes, dando suporte ao uso do modelo animal para o estudo da doença. A análise por MET e MEV permitiram a caracterização dos FS, uma vez que os corpúsculos lamelares constituem organelas armazenadoras de surfactante presentes exclusivamente em FS da camada sinovial interna. O comportamento dos FS murinos em resposta ao estímulo com IL-33 confirmam a participação dessa citocina no ambiente inflamatório da CIA e podem ter implicações no estudo e desenvolvimento de alvos terapêuticos.The pathophysiology of rheumatoid arthritis (RA) involves the participation of various cells and cytokines. Interleukin 33 (IL-33) is a recently described member of the family of interleukin 1 (IL-1) and its role in the development and perpetuation of the inflammatory response has been demonstrated in several studies in RA patients and in experimental models. In the synovial tissue, synovial fibroblasts (SF) assume behavior in critical inflammatory environment being involved in RA synovitis and structural damage cycle through production of inflammatory cytokines and matrix metalloproteinases (MMPs). Comparative ultrastructural morphology of SF derived from synovial fluid and synovial tissue of patients with RA and experimental model of collagen-induced arthritis (CIA). To study the effect of IL -33 stimulation on these cells for the production of interleukin-6 (IL-6) and MMPs 1 and 3. Evaluate the production of MMPs 1 and 3 after stimulation with tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha) and interleukin-1 beta (IL-1 beta). A protocol of cultured fibroblasts from synovium and synovial fluid of RA patients and mice with CIA were established. Human cells were used between the fourth and eighth passages and cells CIA model between 27th and 38th passages. Cells were compared morphologically by transmission (TEM) and scaning electron microscopy (SEM) and scanning. Basal levels of IL-6 were evaluated in murine and human SF. The CIA model SF were stimulated for 18 hours with IL-33 at doses 1, 3, 10, 30 and 100ng/ml TNF-alpha and IL-6 was identified by ELISA. Human SF received stimulation with 10ng/mL IL-33 and IL-6 concentrations were measured after 1, 3, 6, 9, 12 and 24 hours. Also SF were stimulated with human TNF-alpha and IL-1b at doses of 0.5, 1, 5 and 10 ng/ml each alone for 18 hours, and production of MMP 1 and 3 was analyzed by ELISA. Human and murine SF exhibited similar ultrastructural morphology with abundant cytoplasm and presence of lamellated corpuscles. In the CIA model mean basal production of IL-6 was 73,94 (± 4,0) ng/mL and after stimulation with IL -33 increased the production of IL-6 with increasing doses of IL -33. There was no detectable level of basal TNF-alpha or after stimulation with IL -33. In human cells, the concentrations of MMP-1 positively correlated with increased TNF- alpha and IL- 1 beta. The MMP- 1 concentration exceeded the limit of detection method. Human SF from patients with RA and SF from CIA model exhibit similar morphological characteristics, supporting the use of an animal model for the study of disease. The SEM and TEM analysis allowed characterization of SF, since the corpuscles lamellar surfactant-storage organelles are unique synovial fibroblasts inner layer. The behavior of murine SF in response to stimulation with IL -33 confirms the involvement of this cytokine in the inflammatory environment of CIA and has implications for the study and development of therapeutic targets.Universidade Federal de Minas GeraisUFMGCélulas cultivadasFibroblastos/efeitos de drogasReumatologiaArtrite reumatóide/fisiopatologiaArtrite experimentalArtrite reumatóide/terapiaInterleucinaArtrite reumatoideTerapia biológicaArtriteCultura de célulasArtrite induzida por colágenoInterleucina 33MorfologiasinovialMicroscopia eletrônicaArtrite reumatoideFibroblastoEstudo morfofuncional comparativo de fibroblastos sinoviais de pacientes com artrite reumatóide e de modelo experimental de artrite induzida por colágenoinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGORIGINALrafaela_bicalho_viana_m_pspv.pdfapplication/pdf4251551https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUOS-9UHNN5/1/rafaela_bicalho_viana_m_pspv.pdf74967679bd6cc892be711148d53c8d60MD51TEXTrafaela_bicalho_viana_m_pspv.pdf.txtrafaela_bicalho_viana_m_pspv.pdf.txtExtracted texttext/plain136005https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUOS-9UHNN5/2/rafaela_bicalho_viana_m_pspv.pdf.txt72c19bb81b2ce6ef26b7a335a1dcc9c7MD521843/BUOS-9UHNN52019-11-14 12:43:13.005oai:repositorio.ufmg.br:1843/BUOS-9UHNN5Repositório de PublicaçõesPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2019-11-14T15:43:13Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false |
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Estudo morfofuncional comparativo de fibroblastos sinoviais de pacientes com artrite reumatóide e de modelo experimental de artrite induzida por colágeno Rafaela Bicalho Viana Macedo Cultura de células Artrite induzida por colágeno Interleucina 33 Morfologia sinovial Microscopia eletrônica Artrite reumatoide Fibroblasto Células cultivadas Fibroblastos/efeitos de drogas Reumatologia Artrite reumatóide/fisiopatologia Artrite experimental Artrite reumatóide/terapia Interleucina Artrite reumatoide Terapia biológica Artrite |
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A fisiopatologia da artrite reumatoide (AR) envolve a participação de diversas células e citocinas. A interleucina 33 (IL-33) é um membro recentemente descrito da família da interleucina 1 (IL-1) e seu papel no desenvolvimento e perpetuação da resposta inflamatória vem sendo demonstrado em diversos estudos em pacientes com AR e em modelos experimentais. Na membrana sinovial, fibroblastos sinoviais (FS) assumem comportamento crucial no processo inflamatório da AR estando implicadas na patogênese da sinovite e do dano estrutural, através da produção de citocinas inflamatórias e metaloproteinases (MMPs). Comparar a morfologia de FS do líquido articular e do tecido sinovial de pacientes com AR com FS obtidos de modelo experimental de artrite induzida pelo colágeno (CIA) por microscopia óptica e eletrônica. Estudar o efeito do estímulo com IL-33 sobre essas células quanto à produção de interleucina-6 (IL-6) e MMPs 1 e 3. Adicionalmente avaliar a produção de MMPs 1 e 3 após estímulo com fator de necrose tumoral alfa (TNF-alfa) e interleucina 1 beta (IL-1 beta). Estabeleceu-se protocolo de cultivo de fibroblastos de sinóvia e líquido sinovial de pacientes com AR e de camundongos com CIA. Foram utilizadas células humanas entre a quarta e oitava passagens e células de modelo de CIA entre 27ª e 38ª passagens. As células foram comparadas morfologicamente por microscopia óptica e eletrônica de transmissão (MET) e varredura (MEV). As concentrações basais de IL-6 foram avaliadas nos FS humanos e murinos. Os FS de modelo de CIA foram estimulados por 18 horas com IL-33 nas doses de 1, 3, 10, 30 e 100ng/mL e a produção de TNF-alfa e IL-6 foi identificada pela técnica de ELISA. FS humanos receberam estímulo com IL-33 10ng/mL e as concentrações de IL-6 foram dosadas após 1, 3, 6, 9, 12 e 24 horas. FS humanos também foram estimulados com TNF-alfa e IL-1b nas doses 0,5; 1, 5 e 10 ng/mL cada um isoladamente por 18 horas e a produção de MMP 1 e 3 foi analisada por ELISA. FS humanos e murinos exibiram morfologia ultraestrutural semelhante, com citoplasma abundante e presença de corpúsculos lamelares. No modelo de CIA a produção basal média de IL-6 foi de 73,94 (± 4,0) ng/mL e após estímulo com IL-33 houve aumento na produção de IL-6 com doses crescentes de IL-33. Não foi detectado nível de TNF-alfa basal ou após estímulo com IL-33. Nas células humanas, as concentrações de MMP-1 se correlacionaram positivamente com as doses crescentes de TNF-alfa e IL-1 beta. As concentrações de MMP-3 ultrapassaram os limites de detecção do método. FS humanos de pacientes com AR e do modelo de CIA exibem características morfológicas semelhantes, dando suporte ao uso do modelo animal para o estudo da doença. A análise por MET e MEV permitiram a caracterização dos FS, uma vez que os corpúsculos lamelares constituem organelas armazenadoras de surfactante presentes exclusivamente em FS da camada sinovial interna. O comportamento dos FS murinos em resposta ao estímulo com IL-33 confirmam a participação dessa citocina no ambiente inflamatório da CIA e podem ter implicações no estudo e desenvolvimento de alvos terapêuticos. |
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