Trans-sialidase recombinante de Trypanosoma cruzi e parasitos nocautes para trans-sialidases como modelos de vacinas para doença de chagas
Autor(a) principal: | |
---|---|
Data de Publicação: | 2020 |
Tipo de documento: | Tese |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UFMG |
Texto Completo: | http://hdl.handle.net/1843/59936 |
Resumo: | As trans-sialidases (TS) são proteínas de superfície codificadas por uma família multigênica com mais de 1400 cópias presentes no genoma do parasito Trypanosoma cruzi. Os membros dessa família foram classificados em oito grupos, sendo os membros do grupo I, alvos do nosso estudo, aqueles que incluem as trans-sialidases com atividade enzimática e repetições de 12 aminoácidos na porção C-terminal da proteína, denominadas SAPA (Shed Acute Phase Antigen). A função das TS é transferir ácido siálico de glicoconjugados do hospedeiro para proteínas do tipo mucinas também presentes na superfície do parasito. Essa atividade pode estar relacionada com a virulência do parasito, pois estudos indicam que estaria envolvida com a invasão da célula hospedeira e evasão do sistema imune. Foi demonstrado também que as repetições SAPA presentes na porção C-terminal de algumas TS, além de direcionar a resposta imune humoral contra essa região da proteína, é capaz de aumentar a meia vida da enzima no sangue. Proteínas da família das transsialidases são largamente exploradas em estudos de vacina para a doença de Chagas, mostrando serem promissoras como antígenos vacinais. No nosso estudo, testamos um membro da família das trans-sialidases que possui o sítio ativo e 19 repetições SAPA, em ensaios de imunização utilizando versões recombinantes dessa proteína com e sem repetições SAPA. Após imunização de camundongos com cada proteína e desafio com uma cepa virulenta do parasito foi a parasitemia nos animais foi avaliada. A maior redução na parasitemia foi observada nos animais imunizados com a proteína que não contém as repetições SAPA. Paralelamente, foi testada uma segunda estratégia de vacina para a doença de Chagas, utilizando parasitos nocautes para os genes das TS ativas gerados por meio da tecnologia CRISPR-Cas9. Além de demonstrar a ausência de infectividade pelos parasitos nocautes, a imunização de camundongos com esses parasitos foi capaz de conferir 100% de proteção contra o desafio por uma cepa virulenta do T. cruzi. Assim, além do estudo com a proteína TS recombinante, uma formulação contendo parasitos atenuados vivos mostrou-se promissora para o desenvolvimento de uma vacina para a doença de Chagas. |
id |
UFMG_b0389c9f4d4f20d4e3878ca79557907c |
---|---|
oai_identifier_str |
oai:repositorio.ufmg.br:1843/59936 |
network_acronym_str |
UFMG |
network_name_str |
Repositório Institucional da UFMG |
repository_id_str |
|
spelling |
Santuza Maria Ribeiro Teixeirahttp://lattes.cnpq.br/1441035148021341Caroline Junqueira GiustaAlexandre de Magalhães Vieira MachadoEdmundo Carlos GrisardLucia Mendonça PreviatoLuis Henrique Francohttp://lattes.cnpq.br/0587262675470333Nailma Silva Aprigio dos Santos2023-10-24T16:00:23Z2023-10-24T16:00:23Z2020-06-29http://hdl.handle.net/1843/59936As trans-sialidases (TS) são proteínas de superfície codificadas por uma família multigênica com mais de 1400 cópias presentes no genoma do parasito Trypanosoma cruzi. Os membros dessa família foram classificados em oito grupos, sendo os membros do grupo I, alvos do nosso estudo, aqueles que incluem as trans-sialidases com atividade enzimática e repetições de 12 aminoácidos na porção C-terminal da proteína, denominadas SAPA (Shed Acute Phase Antigen). A função das TS é transferir ácido siálico de glicoconjugados do hospedeiro para proteínas do tipo mucinas também presentes na superfície do parasito. Essa atividade pode estar relacionada com a virulência do parasito, pois estudos indicam que estaria envolvida com a invasão da célula hospedeira e evasão do sistema imune. Foi demonstrado também que as repetições SAPA presentes na porção C-terminal de algumas TS, além de direcionar a resposta imune humoral contra essa região da proteína, é capaz de aumentar a meia vida da enzima no sangue. Proteínas da família das transsialidases são largamente exploradas em estudos de vacina para a doença de Chagas, mostrando serem promissoras como antígenos vacinais. No nosso estudo, testamos um membro da família das trans-sialidases que possui o sítio ativo e 19 repetições SAPA, em ensaios de imunização utilizando versões recombinantes dessa proteína com e sem repetições SAPA. Após imunização de camundongos com cada proteína e desafio com uma cepa virulenta do parasito foi a parasitemia nos animais foi avaliada. A maior redução na parasitemia foi observada nos animais imunizados com a proteína que não contém as repetições SAPA. Paralelamente, foi testada uma segunda estratégia de vacina para a doença de Chagas, utilizando parasitos nocautes para os genes das TS ativas gerados por meio da tecnologia CRISPR-Cas9. Além de demonstrar a ausência de infectividade pelos parasitos nocautes, a imunização de camundongos com esses parasitos foi capaz de conferir 100% de proteção contra o desafio por uma cepa virulenta do T. cruzi. Assim, além do estudo com a proteína TS recombinante, uma formulação contendo parasitos atenuados vivos mostrou-se promissora para o desenvolvimento de uma vacina para a doença de Chagas.Trans-sialidases (TS) are surface proteins encoded by a multigenic family with more than 1400 copies present in the genome of the parasite Trypanosoma cruzi. The members of this family were classified into eight groups, the members of group I, the targets of our study, being those that include trans-sialidases with enzymatic activity and with a 12 amino acids repeat in the C-terminal portion of the protein, called SAPA ( Shed Acute Phase Antigen). The function of TS is to transfer sialic acid from host glycoconjugates to mucin-like proteins also present on the parasite's surface. This activity appears to be related to the virulence of the parasite, as studies have indicated that it is involved with invasion of the host cell and evasion of the immune system. It has also been shown that the SAPA repeats present in the C-terminal portion of some TS, in addition to directing the humoral immune response against this region of the protein, is capable of increasing the half-life of the enzyme in the blood. Proteins of the trans-sialidase family are widely explored in vaccine studies for Chagas disease, showing that they are promising as vaccine antigens. In this study, we tested a member of the active trans-sialidase group I, which contains 19 SAPA repeats, in immunization assays using recombinant versions of this protein with and without SAPA repeats. After immunization of mice with each protein and challenge with a virulent strain of the parasite, parasitemia in animals was determined. The greatest reduction in parasitemia was observed in animals immunized with the protein that does not contain the SAPA repeats. At the same time, another vaccine strategy for Chagas disease was tested, using knockout parasites for the genes of active TS generated through the CRISPRCas9 technology. In addition to demonstrating the absence of infectivity of the knockout parasites, the immunization of mice with these parasites was able to provide 100% protection against the challenge by a virulent strain of T. cruzi. Thus, in addition to the study with recombinant TS protein, a formulation containing live attenuated parasites was revealed as a promising strategy for the development of a vaccine for Chagas disease.porUniversidade Federal de Minas GeraisPrograma de Pós-Graduação em Bioquímica e ImunologiaUFMGBrasilICB - DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA E IMUNOLOGIABioquímica e imunologiaDoença de ChagasTrypanosoma cruziNeuraminidaseTrans-sialidaseTrypanosoma cruziTrans-sialidase recombinante de Trypanosoma cruzi e parasitos nocautes para trans-sialidases como modelos de vacinas para doença de chagasinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGORIGINALTese Nailma diploma final.pdfTese Nailma diploma final.pdfapplication/pdf2778674https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/59936/1/Tese%20Nailma%20diploma%20final.pdfc9d10021a75c64bb45c12de5eec7eabfMD51LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-82118https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/59936/2/license.txtcda590c95a0b51b4d15f60c9642ca272MD521843/599362023-10-24 13:00:24.185oai:repositorio.ufmg.br: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ório de PublicaçõesPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2023-10-24T16:00:24Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false |
dc.title.pt_BR.fl_str_mv |
Trans-sialidase recombinante de Trypanosoma cruzi e parasitos nocautes para trans-sialidases como modelos de vacinas para doença de chagas |
title |
Trans-sialidase recombinante de Trypanosoma cruzi e parasitos nocautes para trans-sialidases como modelos de vacinas para doença de chagas |
spellingShingle |
Trans-sialidase recombinante de Trypanosoma cruzi e parasitos nocautes para trans-sialidases como modelos de vacinas para doença de chagas Nailma Silva Aprigio dos Santos Trans-sialidase Trypanosoma cruzi Bioquímica e imunologia Doença de Chagas Trypanosoma cruzi Neuraminidase |
title_short |
Trans-sialidase recombinante de Trypanosoma cruzi e parasitos nocautes para trans-sialidases como modelos de vacinas para doença de chagas |
title_full |
Trans-sialidase recombinante de Trypanosoma cruzi e parasitos nocautes para trans-sialidases como modelos de vacinas para doença de chagas |
title_fullStr |
Trans-sialidase recombinante de Trypanosoma cruzi e parasitos nocautes para trans-sialidases como modelos de vacinas para doença de chagas |
title_full_unstemmed |
Trans-sialidase recombinante de Trypanosoma cruzi e parasitos nocautes para trans-sialidases como modelos de vacinas para doença de chagas |
title_sort |
Trans-sialidase recombinante de Trypanosoma cruzi e parasitos nocautes para trans-sialidases como modelos de vacinas para doença de chagas |
author |
Nailma Silva Aprigio dos Santos |
author_facet |
Nailma Silva Aprigio dos Santos |
author_role |
author |
dc.contributor.advisor1.fl_str_mv |
Santuza Maria Ribeiro Teixeira |
dc.contributor.advisor1Lattes.fl_str_mv |
http://lattes.cnpq.br/1441035148021341 |
dc.contributor.advisor-co2.fl_str_mv |
Caroline Junqueira Giusta |
dc.contributor.referee1.fl_str_mv |
Alexandre de Magalhães Vieira Machado |
dc.contributor.referee2.fl_str_mv |
Edmundo Carlos Grisard |
dc.contributor.referee3.fl_str_mv |
Lucia Mendonça Previato |
dc.contributor.referee4.fl_str_mv |
Luis Henrique Franco |
dc.contributor.authorLattes.fl_str_mv |
http://lattes.cnpq.br/0587262675470333 |
dc.contributor.author.fl_str_mv |
Nailma Silva Aprigio dos Santos |
contributor_str_mv |
Santuza Maria Ribeiro Teixeira Caroline Junqueira Giusta Alexandre de Magalhães Vieira Machado Edmundo Carlos Grisard Lucia Mendonça Previato Luis Henrique Franco |
dc.subject.por.fl_str_mv |
Trans-sialidase Trypanosoma cruzi |
topic |
Trans-sialidase Trypanosoma cruzi Bioquímica e imunologia Doença de Chagas Trypanosoma cruzi Neuraminidase |
dc.subject.other.pt_BR.fl_str_mv |
Bioquímica e imunologia Doença de Chagas Trypanosoma cruzi Neuraminidase |
description |
As trans-sialidases (TS) são proteínas de superfície codificadas por uma família multigênica com mais de 1400 cópias presentes no genoma do parasito Trypanosoma cruzi. Os membros dessa família foram classificados em oito grupos, sendo os membros do grupo I, alvos do nosso estudo, aqueles que incluem as trans-sialidases com atividade enzimática e repetições de 12 aminoácidos na porção C-terminal da proteína, denominadas SAPA (Shed Acute Phase Antigen). A função das TS é transferir ácido siálico de glicoconjugados do hospedeiro para proteínas do tipo mucinas também presentes na superfície do parasito. Essa atividade pode estar relacionada com a virulência do parasito, pois estudos indicam que estaria envolvida com a invasão da célula hospedeira e evasão do sistema imune. Foi demonstrado também que as repetições SAPA presentes na porção C-terminal de algumas TS, além de direcionar a resposta imune humoral contra essa região da proteína, é capaz de aumentar a meia vida da enzima no sangue. Proteínas da família das transsialidases são largamente exploradas em estudos de vacina para a doença de Chagas, mostrando serem promissoras como antígenos vacinais. No nosso estudo, testamos um membro da família das trans-sialidases que possui o sítio ativo e 19 repetições SAPA, em ensaios de imunização utilizando versões recombinantes dessa proteína com e sem repetições SAPA. Após imunização de camundongos com cada proteína e desafio com uma cepa virulenta do parasito foi a parasitemia nos animais foi avaliada. A maior redução na parasitemia foi observada nos animais imunizados com a proteína que não contém as repetições SAPA. Paralelamente, foi testada uma segunda estratégia de vacina para a doença de Chagas, utilizando parasitos nocautes para os genes das TS ativas gerados por meio da tecnologia CRISPR-Cas9. Além de demonstrar a ausência de infectividade pelos parasitos nocautes, a imunização de camundongos com esses parasitos foi capaz de conferir 100% de proteção contra o desafio por uma cepa virulenta do T. cruzi. Assim, além do estudo com a proteína TS recombinante, uma formulação contendo parasitos atenuados vivos mostrou-se promissora para o desenvolvimento de uma vacina para a doença de Chagas. |
publishDate |
2020 |
dc.date.issued.fl_str_mv |
2020-06-29 |
dc.date.accessioned.fl_str_mv |
2023-10-24T16:00:23Z |
dc.date.available.fl_str_mv |
2023-10-24T16:00:23Z |
dc.type.status.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/publishedVersion |
dc.type.driver.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
format |
doctoralThesis |
status_str |
publishedVersion |
dc.identifier.uri.fl_str_mv |
http://hdl.handle.net/1843/59936 |
url |
http://hdl.handle.net/1843/59936 |
dc.language.iso.fl_str_mv |
por |
language |
por |
dc.rights.driver.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/openAccess |
eu_rights_str_mv |
openAccess |
dc.publisher.none.fl_str_mv |
Universidade Federal de Minas Gerais |
dc.publisher.program.fl_str_mv |
Programa de Pós-Graduação em Bioquímica e Imunologia |
dc.publisher.initials.fl_str_mv |
UFMG |
dc.publisher.country.fl_str_mv |
Brasil |
dc.publisher.department.fl_str_mv |
ICB - DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA E IMUNOLOGIA |
publisher.none.fl_str_mv |
Universidade Federal de Minas Gerais |
dc.source.none.fl_str_mv |
reponame:Repositório Institucional da UFMG instname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG) instacron:UFMG |
instname_str |
Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG) |
instacron_str |
UFMG |
institution |
UFMG |
reponame_str |
Repositório Institucional da UFMG |
collection |
Repositório Institucional da UFMG |
bitstream.url.fl_str_mv |
https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/59936/1/Tese%20Nailma%20diploma%20final.pdf https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/59936/2/license.txt |
bitstream.checksum.fl_str_mv |
c9d10021a75c64bb45c12de5eec7eabf cda590c95a0b51b4d15f60c9642ca272 |
bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv |
MD5 MD5 |
repository.name.fl_str_mv |
Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG) |
repository.mail.fl_str_mv |
|
_version_ |
1803589170232295424 |