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Jacques Robert Nicolihttp://lattes.cnpq.br/4311899333835868Dorota CzeruckaFrancisco José Pennahttp://lattes.cnpq.br/2549518899194260Flaviano dos Santos Martins2023-04-10T13:08:35Z2023-04-10T13:08:35Z2008-02-20http://hdl.handle.net/1843/51742Probióticos são definidos como microrganismos viáveis que exibem um efeito benéfico na saúde do hospedeiro, quando ingeridos em quantidades suficientes. Muitas espécies de bactérias são usadas para esse fim e a única levedura utilizada como probióticos em seres humanos é Saccharomyces boulardii. Resultados anteriores obtidos em nosso laboratório mostraram que a levedura Saccharomyces cerevisiae linhagem UFMG 905, isolada da produção de cachaça, foi capaz de colonizar e sobreviver no trato gastrintestinal de camundongos, isentos de germes e convencionais, respectivamente, além de proteger esses animais contra um desafio oral com Salmonella enterica subsp. enterica sorovar Typhimurium e Clostridium difficile. Na primeira parte desse trabalho, os efeitos de S. cerevisiae UFMG 905 na translocação de Salm. Typhimurium para os linfonodos mesentéricos, placas de Peyer, baço e fígado, assim como o efeito no sistema imune, pela contagem de células de Küpffer, produção de imunoglobulinas e clareamento de Escherichia coli B41 da corrente sanguínea, foram avaliados em camundongos gnotobióticos e/ou convencionais. O tratamento com a levedura reduziu significantemente a translocação de Salm. Typhimurium para o fígado de animais gnotobióticos e, para todos os órgãos testados, em animais convencionais. O número de células de Küpffer (por 100 hepatócitos) foi significantemente maior (P < 0,05) em camundongos monoassociados com a levedura (52,9 ± 15,7) que em camundongos isentos de germes (38,1 ± 9,0). Provavelmente, como uma consequência do aumento do número de células de Küpffer, o clareamento de E. coli B41 da corrente sanguínea foi mais eficiente nos animais monoassociados com a levedura, quando comparado com os animais controle isentos de germes. Foram observados maiores níveis de sIgA no conteúdo intestinal e de IgA e IgM no soro (P < 0,05) nos camundongos monoassociados com a levedura que no grupo isento de germes. Concluindo, a proteção observada contra a bactéria enteropatogênica em nosso estudo anterior foi, provavelmente, devida à modulação local e sistêmica do sistema imune de camundongos tratados com S. cerevisiae UFMG 905. Na segunda parte desse trabalho, estudou-se os efeitos de S. boulardii e S. cerevisiae UFMG 905 na inflamação e na sinalização celular induzidos pela Salm. Typhimurium 14028, em células T84. Observou-se que os dois probióticos mantiveram a resistência elétrica transepitelial e diminuiram, significativamente, a secreção de IL-8 em células T84 infectadas por Salm. Typhimurium 14028 (P < 0,05). Saccharomyces cerevisiae UFMG 905 e S. boulardii diminuiram, significativamente, os níveis de invasão pela Salm. Typhimurium 14028 (P < 0,05), mas nenhum efeito das leveduras nocrescimento ou adesão bacteriana em células T84 foi observado. Diferentemente de S. boulardii, S. cerevisiae UFMG 905 não foi capaz de diminuir a ativação de Rac1 e Cdc42 em células infectadas por Salm. Typhimurium 14028. Essas duas proteínas são Rho-GTPases ativadas pela bactéria e estão envolvidas na internalização de bactérias invasivas. A ligação de Salm. Typhimurium 14028 à superfície de S. cerevisiae UFMG 905 e S. boulardii, e não às células epiteliais do intestino, pode ser responsável pela diminuição da invasão e ativação de MAPKs (mitogen-activated protein kinases) e, conseqüentemente, pela diminuição dos níveis de IL-8, uma vez que esse processo diminui o número de bactérias ligadas às células T84. Entretanto, a diminuição dos níveis de IL-8 também pode ser explicada por uma imunomodulação, via secreção de citocinas anti-inflamatórias, como a IL-10, mas essa hipótese não foi testada nesse trabalho. A presença das leveduras em células infectadas com Salm. Typhimurium 14028 também reduziu e/ou inibiu a fosforilação das MAPKs ERK1/2, p38 e JNK, mas não diminuiu a ligação do fator de transcrição para IL-8 (NF-κB) ao DNA, sugerindo que a diminuição dos níveis de IL-8 não foi devido à inibição do fator de transcrição para IL-8, mas, provavelmente, ao efeito das leveduras na inibição da MAPK p38, que é a proteína responsável pela estabilização do mRNA para IL-8. Uma outra explicação é o fato de as duas leveduras inibirem a MAPK JNK, uma vez que AP-1 (outro fator de transcrição para IL-8) é dependente da fosforilação dessa proteína. Finalmente, S. cerevisiae UFMG 905 e S. boulardii inibem, também, a ativação de mecanismos anti inflamatórios (a via PI3K/Akt) induzidos por Salm. Typhimurium 14028 em células T84. Concluindo, S. cerevisiae UFMG 905 e S. boulardii apresentaram um efeito protetor e modulador na função de barreira e na sinalização celular induzida em células T84 pela Salm. Typhimurium 14028.Probiotics are defined as viable microorganisms that exhibit a beneficial effect on the host health when ingested in adequate amounts. Many species of bacteria are used for this purpose and the only one yeast used as probiotic in humans is Saccharomyces boulardii. Previous results in our laboratory showed that Saccharomyces cerevisiae strain UFMG 905, isolated from “cachaça” production, was able to colonize and survive in the gastrointestinal tract of germ-free and conventional mice, respectively, and to protect these animals against oral challenge with Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium and Clostridium difficile. In the first part of this work, the effects of S. cerevisiae UFMG 905 on the translocation of Salm. Typhimurium to mesenteric lymph nodes, Peyer’s patches, spleen and liver, as well as on the immune system by number of Küpffer cells, immunoglobulin production and clearance of Escherichia coli B41, were evaluated in gnotobiotic and/or conventional mice. The treatment with the yeast reduced significantly the translocation of Salm. Typhimurium to liver in gnotobiotic animals and to all the organs tested in conventional mice. The number of Küpffer cells per 100 hepatocytes in liver was significantly higher (P < 0.05) in yeast mono-associated mice (52.9 ± 15.7) than in germ-free controls (38.1 ± 9.0). Probably, as a consequence, clearance of E. coli B41 from the bloodstream was more efficient in yeast mono-associated animals when compared to germ-free mice. Higher levels (P < 0.05) of sIgA in intestinal content and of IgA and IgM in serum were observed in yeast mono-associated mice when compared to germ-free group. Concluding, the protection against pathogenic bacteria observed in a previous study was probably due to a modulation of both local and systemic immunity of mice treated with S. cerevisiae UFMG 905. In a second part of this work, we have studied the effects of S. boulardii and S. cerevisiae UFMG 905 on the inflammation and signal transduction induced by Salm. Typhimurium ATCC 14028 in T84 cells. We have observed that both probiotics maintained the transmonolayer electrical resistance and significantly diminished IL-8 secretion in Salm. Typhimurium 14028-infected T84 cells (P < 0.05). Saccharomyces cerevisiae UFMG 905 and S. boulardii also decreased significantly the levels of Salm. Typhimurium 14028 invasion (P < 0.05), but had no effect on Salm. Typhimurium 14028 growth or adhesion to T84 cells. Differently from S. boulardii, S. cerevisiae UFMG 905 was not implicated in the diminution of the activation of Rac1 and Cdc42 in Salm. Typhimurium 14028-infected cells, which are Rho-GTPases activated by the bacteria involved in the internalization of invasive bacteria. The binding of Salm.Typhimurium 14028 to S. cerevisiae UFMG 905 and S. boulardii surface instead of T84 cells may be responsible for the diminution of invasion and activation of MAPKs (mitogen-activated protein kinases) and consequently by the diminution of IL-8 levels, since this process diminishes the number of bacteria bound to T84 cells. However, the diminution of IL-8 may also be explained by an immunomodulation through secretion of anti-inflammatory cytokines, such as IL-10, but this hypothesis was not tested in this work. The presence of the yeasts in Salm. Typhimurium 14028-infected cells also reduced and/or inhibited the phosphorylation of ERK1/2, p38 and JNK MAPKs, but did not inhibit NF-κB DNA binding activity, suggesting that the diminution of IL-8 levels was not due to inhibition of the IL-8 transcription factor but more probably to the effects of the yeasts on the p38 MAPK inhibition, which is responsible for the stabilization of IL-8 mRNA. The inhibition of JNK by the yeasts may be another explanation, once AP-1, another IL-8 transcription factor, is dependent on the phosphorylation of this protein. Finally, S. cerevisiae UFMG 905 and S. boulardii inhibited the activation of anti-inflammatory mechanism (PI3K/Akt pathway) induced by Salm. Typhimurium 14028 in T84 cells. Concluding, S. cerevisiae UFMG 905 and S. boulardii showed a protective and modulating effect on barrier function and signal transduction pathway in T84 cells when infected by Salm. Typhimurium 14028.porUniversidade Federal de Minas GeraisPrograma de Pós-Graduação em Ciências da Saúde - Saúde da Criança e do AdolescenteUFMGBrasilMEDICINA - FACULDADE DE MEDICINAhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/pt/info:eu-repo/semantics/openAccessProbióticos/efeitos adversosSaccharomyces boulardiiSaccharomyces cerevisiaeSalmonella entericaInfecções por Salmonella/terapiaDissertação AcadêmicaProbióticosBactériasSaccharomyces cerevisiaeEfeito de dois probióticos, Saccharomyces boulardii e Saccharomyces cerevisiae linhagem UFMG 905, na resposta inflamatória induzida por Salmonella enterica subsp. enterica sorovar. Typhimuriuminfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-82118https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/51742/3/license.txtcda590c95a0b51b4d15f60c9642ca272MD53ORIGINALTese Flaviano.pdfTese Flaviano.pdfapplication/pdf14594065https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/51742/1/Tese%20Flaviano.pdf9aa2d6b565964c05129f485efeedf4c9MD51CC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; charset=utf-8811https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/51742/2/license_rdfcfd6801dba008cb6adbd9838b81582abMD521843/517422023-04-10 10:08:35.751oai:repositorio.ufmg.br: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ório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2023-04-10T13:08:35Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false
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