Papel do fator de troca de nucleotídeos guanina RASGEF1B na regulação da expressão de SCHLAFEN-4 e SERPINB2 em macrófagos

• Autor(a) principal: Sérgio Queirós Lima
• Data de Publicação: 2023
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/57350
• topic: RASGEF1B; MACRÓFAGOS; EXPRESSÃO GENICA; Biologia Celular; Fatores de Troca do Nucleotídeo Guanina; Proteínas ras; Macrófagos; Expressão Gênica

Slfn4 e Serpinb2 são genes expressos em macrófagos que podem ter seus níveis de mRNA aumentados em resposta à estimulação por agonistas inflamatórios de receptores do tipo Toll. Em análises de sequenciamento global de RNAs, um cluster contendo Slfn4 e Serpinb2 indica que a expressão desses encontra-se reduzida na ausência do fator de troca de nucleotídeos guanina RasGEF1b em macrófagos derivados da medula óssea de camundongos estimulados com LPS. No entanto, não se encontra completamente estabelecido como a expressão de Slfn4 é regulada em macrófagos condições de repouso ou inflamatórias, enquanto que Serpinb2 não possui evidências conclusivas. Ademais, permanece por ser estabelecida a caracterização do promotor de Slfn4 com os seus sítios de ligação para fatores de transcrição e sua consequente ativação transcricional, e o papel de RasGEF1b sobre a regulação transcricional de Serpinb2. Baseado nesses questionamentos, nós testamos a hipótese que o RasGEF1b regula a expressão de Slfn4 e Serpinb2 em macrófagos. Análises por RT-qPCR confirmam que os níveis do Slfn4 e Serpinb2 são reduzidos em macrófagos RasGEF1b-KO não tratados ou tratados com LPS, e o efeito da ausência de RasGEF1b sob a expressão gênica observada em células não estimuladas é mantido após o tratamento com LPS. A expressão de Slfn4, Serpinb2 e genes do cluster também foram reduzidos em níveis basais em macrófagos RAW264.7 silenciados para RasGEF1b tratados e não tratados com LPS. Porém, em Ch25h foi identificado o efeito reverso. Análises dos motivos de ligação para fatores de transcrição específicos na região promotora putativa de Slfn4, Serpinb2 e de genes do mesmo cluster revelaram a presença dos motivos para os fatores reguladores IRFs, AP-1, STATs, ATF e GATA. De acordo, os níveis de Slfn4 e Serpinb2 em macrófagos de RasGEF1b-KO ativados com LPS e IFN mantiveram-se em níveis reduzidos e comparáveis aos de células não estimuladas. A super expressão de RasGEF1b induziu a atividade transcricional de Serpinb2, enquanto a mesma foi reduzida em macrófagos RAW264.7 silenciados para RasGEF1b. A mutação nos sítios de ligação para os fatores de transcrição CEBP e AP-1 reduziu a atividade de luciferase do promotor de Serpinb2 em células HEK293 super expressando RasGEF1b por 24 horas, mas não em 48 horas para o sitio mutado de CEBP. Nossos resultados sugerem que RasGEF1b facilita a transcrição gênica de Slfn4 e Serpinb2 em níveis suficientes para permitir sua expressão em níveis máximos após a ativação celular por agentes inflamatórios.