3-hidróxi-quinurenina transaminase de Aedes aegypti: clonagem, expressão, avaliação funcional e síntese de prováveis inibidores seletivos
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Data de Publicação: | 2016 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UFPE |
Texto Completo: | https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/23437 |
Resumo: | A busca por novos métodos de controle do vetor Aedes aegypti tem sido amplamente realizada para diminuir a transmissão de arboviroses como Zika e Chikungunya que têm um grande impacto em saúde pública atualmente. Macromoléculas envolvidas em vias metabólicas essenciais para a sobrevida do mosquito tornam-se alvos moleculares importantes para o controle desses vetores. Uma das vias de detoxificação desta espécie é a via das quinureninas, que em uma das etapas, converte 3-hidroxiquinurenina (3-HK - espécie reativa de oxigênio e nitrogênio) em ácido xanturênico (substância atóxica) por meio da 3hidroxiquinurenina transaminase (HKT). A proposta deste trabalho é desenvolver larvicidas que atuam como inibidores da atividade enzimática da HKT, causando morte do inseto. Os inibidores sintetizados foram planejados após resultados de Docking Molecular obtidos por nosso grupo com a HKT ortóloga de Anopheles gambiae. Esses compostos são inéditos e foram bem caracterizados, exibindo alto grau de pureza. A síntese foi realizada em três etapas e com rápida purificação, fatores facilitadores para a produção em larga escala. A proteína HKT recombinante fusionada à Glutationa-S-transferase (HKT/GST) foi produzida em Escherichia coli para avaliação da inibição dos compostos sintetizados. A HKT/GST purificada e dialisada apresentou um padrão de migração de aproximadamente 62 kDa e exibiu atividade em avaliação funcional através de ensaio enzimático desenvolvido para análise em HPLC com detector UV. Os 12 compostos testados mostraram inibição parcial da HKT/GST, sendo os compostos com o anel aromático com substituição para-anisoíla e sem substituição os melhores inibidores, com valores de razão da área do pico de 3-HK na reação sem inibidor e após a inibição que são 0,69 e 0,64 respectivamente. Isso significa em relação à razão das áreas do pico do 3-HK, quanto mais próxima de zero, mais diferentes são as áreas e consequentemente maior o acúmulo do substrato. Esses resultados corroboram com a hipótese de que os sais sintetizados são inibidores da HKT e servirão como molde para o desenvolvimento de inibidores mais potentes. |
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MACIEL, Larissa Gonçalveshttp://lattes.cnpq.br/6660959469007557http://lattes.cnpq.br/6789933923497416ANJOS, Janaína Versiani dos2018-01-30T19:47:13Z2018-01-30T19:47:13Z2016-04-11https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/23437A busca por novos métodos de controle do vetor Aedes aegypti tem sido amplamente realizada para diminuir a transmissão de arboviroses como Zika e Chikungunya que têm um grande impacto em saúde pública atualmente. Macromoléculas envolvidas em vias metabólicas essenciais para a sobrevida do mosquito tornam-se alvos moleculares importantes para o controle desses vetores. Uma das vias de detoxificação desta espécie é a via das quinureninas, que em uma das etapas, converte 3-hidroxiquinurenina (3-HK - espécie reativa de oxigênio e nitrogênio) em ácido xanturênico (substância atóxica) por meio da 3hidroxiquinurenina transaminase (HKT). A proposta deste trabalho é desenvolver larvicidas que atuam como inibidores da atividade enzimática da HKT, causando morte do inseto. Os inibidores sintetizados foram planejados após resultados de Docking Molecular obtidos por nosso grupo com a HKT ortóloga de Anopheles gambiae. Esses compostos são inéditos e foram bem caracterizados, exibindo alto grau de pureza. A síntese foi realizada em três etapas e com rápida purificação, fatores facilitadores para a produção em larga escala. A proteína HKT recombinante fusionada à Glutationa-S-transferase (HKT/GST) foi produzida em Escherichia coli para avaliação da inibição dos compostos sintetizados. A HKT/GST purificada e dialisada apresentou um padrão de migração de aproximadamente 62 kDa e exibiu atividade em avaliação funcional através de ensaio enzimático desenvolvido para análise em HPLC com detector UV. Os 12 compostos testados mostraram inibição parcial da HKT/GST, sendo os compostos com o anel aromático com substituição para-anisoíla e sem substituição os melhores inibidores, com valores de razão da área do pico de 3-HK na reação sem inibidor e após a inibição que são 0,69 e 0,64 respectivamente. Isso significa em relação à razão das áreas do pico do 3-HK, quanto mais próxima de zero, mais diferentes são as áreas e consequentemente maior o acúmulo do substrato. Esses resultados corroboram com a hipótese de que os sais sintetizados são inibidores da HKT e servirão como molde para o desenvolvimento de inibidores mais potentes.CNPQThe search for new methods of control of Aedes aegypti has been widely performed to reduce the transmission of arboviruses as Zika and Chikungunya that have a major impact on public health today. Macromolecules involved in essential metabolic pathways for the mosquito survival become important molecular targets for the control of these vectors. One of the detoxification pathways of this species is the kynurenine pathway that in one of the steps, converts 3-hydroxykynurenine (3-HK - reactive oxygen and nitrogen species) in xanturenic acid (non-toxic substance) by 3-hydroxykynurenine transaminase (HKT). The purpose of this work is to develop larvicides that act as inhibitors of the enzymatic activity of HKT, causing insect death. The synthesized inhibitors were planned after results of Molecular Docking obtained by our group with HKT ortholog of Anopheles gambiae. These compounds are unpublished and were well characterized, exhibiting high purity. The synthesis was carried out in three stages and rapid purification, facilitating factors for large-scale production. Recombinant HKT protein fused to the Glutathione S-transferase (HKT/GST) was produced in Escherichia coli for evaluation of inhibition of the synthesized compounds. The HKT/GST purified and dialyzed showed a pattern of migration of approximately 62 kDa and exhibited activity in functional assessment by enzymatic assay developed for analysis on HPLC with UV detector. The 12 tested compounds showed partial inhibition of HKT/GST, which compounds with the aromatic ring substitution para-anisole and without substituent the best inhibitors with ratio values of the peak area of 3-HK in no inhibitor reaction and after inhibition which are 0.69 and 0.64, respectively. This means in relation to the peak area ratio of 3-HK, the nearer to zero, the different between the areas are higher and therefore there is more accumulation of the substrate. These results corroborate the hypothesis that the salts synthesized are HKT inhibitors and serve as a template for the development of more potent inhibitors.porUniversidade Federal de PernambucoPrograma de Pos Graduacao em QuimicaUFPEBrasilAttribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazilhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/info:eu-repo/semantics/openAccessQuímica orgânicaAedes aegypti3-hidróxi-quinurenina transaminase de Aedes aegypti: clonagem, expressão, avaliação funcional e síntese de prováveis inibidores seletivosinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesismestradoreponame:Repositório Institucional da UFPEinstname:Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)instacron:UFPETHUMBNAILDissertação Larissa Gonçalves Maciel dQF UFPE.pdf.jpgDissertação Larissa Gonçalves Maciel dQF UFPE.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1246https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/23437/5/Disserta%c3%a7%c3%a3o%20Larissa%20Gon%c3%a7alves%20Maciel%20dQF%20UFPE.pdf.jpg2fe71317333d097a518b143bd7ce7995MD55ORIGINALDissertação Larissa Gonçalves Maciel dQF UFPE.pdfDissertação Larissa Gonçalves Maciel dQF UFPE.pdfapplication/pdf3957238https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/23437/1/Disserta%c3%a7%c3%a3o%20Larissa%20Gon%c3%a7alves%20Maciel%20dQF%20UFPE.pdf1d2fc6e52d8c1c39483b14245030f062MD51CC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; 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