Avaliação in vitro do potencial terapêutico do extrato de Fasciola hepatica em fibroblastos sinoviais de camundongos com artrite induzida por colágeno

• Autor(a) principal: Pedó, Renata Ternus
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFRGS
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10183/236914
• topic: Artrite reumatóide; Colágeno; Fibroblastos; Membrana sinovial; Fasciola hepatica; Rheumatoid arthritis; Fibroblast-like synoviocytes; Fasciola hepatica extract

A artrite reumatoide (AR) é uma doença autoimune, crônica e sistêmica, onde a inflamação da membrana sinovial articular leva à degradação da cartilagem e do osso, resultando na destruição articular, dor e incapacidade funcional. De etiologia ainda pouco esclarecida, sua prevalência é de cerca de 0,46% no Brasil e 1% no mundo, com ocorrência maior entre as mulheres. Diversos tipos celulares estão envolvidos na patogênese da AR, porém os fibroblastos sinoviais (FLS) se destacam por apresentarem um fenótipo agressivo que medeia a inflamação e a destruição articular. Apesar dos avanços no tratamento da AR, estes apresentam significativos efeitos adversos, altos custos e limitações, salientando a necessidade da busca por novas estratégias terapêuticas. A Fasciola hepatica (F. hepatica) é um helminto causador da doença fasciolose em ruminantes e humanos. Através de produtos excretores-secretores e antígenos do tegumento, a F. hepatica apresenta propriedades imunomoduladoras, as quais já foram estudadas em diferentes tipos celulares, mas não em FLS. Diante disso, avaliamos nesse trabalho o potencial terapêutico in vitro do extrato de F. hepatica em FLS isolados de camundongos com artrite induzida por colágeno. A viabilidade celular dos FLS foi determinada por ensaio de MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide], em que os FLS foram expostos ao extrato de F. hepatica nas concentrações de 60μg/ml, 80μg/ml e 100μg/ml, por 24h, 48h e 72h. A capacidade de aderência dos FLS foi avaliada pela exposição das células ao extrato de F. hepatica na concentração de 100μg/ml por 24h. Os efeitos a longo prazo do tratamento com o extrato de F. hepatica na FLS foram avaliados utilizando o ensaio cumulativo de duplicação da população (CDP) após exposição dos FLS a 100μg/ml de extrato de F. hepatica durante 24h. As células foram contadas a cada 2 dias e replaqueadas na mesma concentração inicial por 8 dias. A liberação de interleucina-6 (IL-6) foi avaliada pelo ensaio de ELISA, para este ensaio os FLS também foram expostos ao extrato de F. hepatica na concentração de 100μg/ml por 24h e, após, foram estimulados com o fator de necrose tumoral α (TNF- α). O extrato de F. hepatica foi capaz de diminuir a viabilidade celular em 48h com a concentração de 100μg/ml quando comparado com o grupo DMEM (p<0.05). Em 72h, as doses de 60μg/ml (p <0,001), 80μg/ml (p <0,001) e 100μg/ml (p <0,0001) do extrato de F. hepatica diminuíram a viabilidade celular quando comparadas com o grupo DMEM. O tratamento com 100μg/ml do extrato por 24h apresentou uma tendência no aumento da liberação de IL-6 pelos FLS quando comparados com o grupo DMEM estimulado. No entanto, o extrato não alterou a capacidade de aderência e o crescimento a longo prazo dos FLS. A partir desses resultados, pode-se concluir que o extrato de F. hepatica não apresentou efeito sobre a aderência e o crescimento ao longo do tempo dos FLS, porém apresentou efeito na viabilidade dos FLS e foi capaz de aumentar a liberação de IL-6 pelos FLS. Portanto, embora esses resultados sejam preliminares, eles são importantes para entender a ação do extrato da F. hepatica nos FLS e indicam um efeito imunomodulatório do extrato sobre os FLS.