O papel da elastase neutrofílica em infecções experimentais por leishmania infantum chagasi

• Autor(a) principal: Moreira, Amanda Ambrosio
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFRJ
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/11422/16451
• topic: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::MICROBIOLOGIA; CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA; Leishmania; Leishmaniose visceral; Infecção; Macrófagos

As leishmanioses são ocasionadas por protozoários do gênero Leishmania e transmitidas pelo flebotomíneo infectado. A leishmaniose apresenta sintomatologia variada, desde lesões cutâneas até a leishmaniose visceral, forma mais grave da doença. O desenvolvimento dos sintomas e a progressão das patologias distintas dependem da espécie de Leishmania, da constituição genética e do estado de saúde do hospedeiro, bem como da resposta imune. A análise dos genomas de diferentes espécies de Leishmania demonstrou que apenas alguns genes são espécie-específicos, sugerindo que a regulação da expressão gênica no parasito também seja fundamental para a patogênese da doença. Em L. major, espécie causadora da leishmaniose cutânea, foram descritos três genes semelhantes à ecotina, um inibidor de serino proteases da família S1A encontrado em bactérias, e denominados ISP1, ISP2, ISP3. Demonstramos que o ISP2 da L. major inibe a atividade da elastase neutrofílica (NE) durante a fagocitose do parasito por macrófagos. L. major transgênicas deficientes em ISP2 apresentam sobrevivência reduzida em macrófagos, devido à ativação de uma via celular envolvendo NE - receptor do tipo Toll 2 (TLR2) e do tipo Toll 4 (TLR4). Contudo, a expressão do ISP2 não foi detectada em L. donovani, causadora da leishmaniose visceral. Em ensaios de infecção in vitro e in vivo o crescimento da L. donovani foi reduzido tanto na presença de um inibidor sintético da NE (NEi), como na infecção de camundongos deficientes em elastase (ela2-/- ). Estes resultados indicam que na infecção por L. donovani a atividade do ISP2 é silenciada em benefício da infecção, por permitir que a via de sinalização celular NE- TLR4-TLR2 permaneça ativada, garantindo a sobrevivência dos parasitos no interior dos macrófagos. A fim de investigar como o balanço ISP2-NE se apresenta nas diferentes espécies viscerotrópicas, avaliamos infecções de macrófagos in vitro e in vivo por L. i. chagasi. A expressão do ISP2 não foi detectada em L. i. chagasi através da técnica de Western blotting. Ensaios de infecção in vitro demonstraram resultados divergentes, ora a ausência ou inibição da NE promove o crescimento do parasito no interior dos macrófagos, ora não há efeitos significativos. Observou-se maior crescimento intracelular do parasito na presença de NEi ou em macrófagos ela2-/- quando comparado com a infecção em macrófagos do background genético (C57BL/6). Ao adicionarmos NE exógena na infecção, o crescimento intracelular dos parasitos foi diminuído após 72h, tanto em macrófagos C57BL/6, como ela2-/-. Em infecções in vivo observamos maior carga parasitária no baço de camundongos ela2-/- do que em C57BL/6. Sugerimos que na infecção por L. i. chagasi, a modulação da atividade da NE é um fator importante para garantir a manutenção e estabelecimento da infecção, similar ao observado em L. major. Porém, reformulação metodológica é necessária para resultados mais conclusivos e confiáveis.