Avaliação de três métodos de extração de DNA de material parafinado para amplificação de DNA genômico pela técnica da PCR

• Autor(a) principal: MESQUITA, Ricardo Alves
• Data de Publicação: 2001
• Outros Autores: ANZAI, Evelyn K., OLIVEIRA, Rogério Nogueira, NUNES, Fábio Daumas
• Tipo de documento: Artigo
• Idioma: eng
• Título da fonte: Pesquisa odontológica brasileira (Online)
• Texto Completo: https://www.revistas.usp.br/pob/article/view/42960
• topic: Polymerase chain reaction; Keratin; DNA; Reação em cadeia por polimerase; Queratina

Existem na literatura vários protocolos para extração de DNA genômico a partir de material fixado em formol e embebido em parafina. A obtenção de DNA genômico é importante para realização de experimentos em biologia molecular, dentre eles a PCR. Este trabalho teve por objetivo otimizar a extração de DNA genômico a partir de material fixado (hiperplasia fibrosa inflamatória) e não-fixado (mucosa bucal normal) em formol, comparando-se três metodologias diferentes: fenol com digestão enzimática, partículas de sílica com e sem digestão enzimática. Para amplificação do DNA pela técnica da PCR, utilizou-se iniciadores para o éxon 7 da citoqueratina humana tipo 14. O sucesso da amplificação foi verificado pela eletroforese do produto em gel de poliacrilamida 8% contendo glicerol 5% corado com prata. Obteve-se amplificação do DNA genômico extraído com fenol/digestão enzimática e com partículas de sílica/digestão enzimática, para ambos tecidos utilizados. O método padronizado tem potencial para auxiliar no diagnóstico histopatológico, assim como no estudo retrospectivo de material de arquivo.