Identificação das variantes dos genes RHD e RHCE em pacientes com doença falciforme usando estratégia de sequenciamento de nova geração

• Autor(a) principal: Ribeiro, Ingrid Helena
• Data de Publicação: 2020
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5179/tde-23082021-103036/
• topic: Anemia falciforme; Anemia sickle cell; Antígenos de grupos sanguíneos; Blood groups antigens; Genotipagem eritrocitária; Genotyping techniques; High-throughput nucleotide sequencing; Rh-Hr blood group system; Sequenciamento de nucleotídeos em larga escala; Sistema do grupo sanguíneo Rh-Hr

Introdução: Os antígenos eritrocitários do sistema de grupo sanguíneo RH são codificados por dois genes altamente homólogos, RHD e RHCE, sendo que os rearranjos gênicos são responsáveis pelas variantes de antígenos por eles codificados. A complexidade dessa variação genética, principalmente em pacientes em regime crônico de transfusão, como aqueles com a doença falciforme (DF), contribui para elevada taxa de aloimunização eritrocitária. Os ensaios moleculares convencionais não conseguem identificar todas as variantes genéticas já descritas para o locus RH, bem como prever novos alelos. O sequenciamento de RHD e RHCE é indicado para ampliar a pesquisa de variantes genéticas de Rh. OBJETIVOS: 1) Padronizar a estratégia de sequenciamento de nova geração (Next Generation Sequencing - NGS) para identificar assertivamente variantes genéticas de Rh entre pacientes com DF com suspeita sorológica de variantes de Rh. 2) Correlacionar dados genéticos com a classificação sorológica dos anticorpos RH não esperados (direcionados contra antígenos para os quais a fenotipagem eritrocitária é positiva). MÉTODOS: Trinta e cinco pacientes com DF com anticorpos RH não esperados foram incluídos. Estratégia de NGS foi desenvolvida para genotipar RHD e RHCE usando primers gene-específicos. Os dados genotípicos e sorológicos foram comparados. RESULTADOS: Os dados obtidos no ensaio de NGS foram específicos para os genes RHD e RHCE. Dez e vinte e cinco alelos variantes de RHD e RHCE foram identificados, respectivamente. Entre todos os casos de anticorpos RH não esperados, 62% foram classificados de maneira imprecisa por análise sorológica e, dentre esses casos, 73,1% foram considerados como potencialmente prejudiciais ao paciente, visto que a classificação inacurada do anticorpo como auto ou alo poderia se associar a aumento do risco de reações hemolíticas pós-transfusionais ou falta de unidades de tipo O RhD negativo para transfusão. Encontrados dois novos alelos não descritos na literatura, ainda necessitando de ensaios sorológicos no intuito de determinar se esses codificam antígenos parciais. CONCLUSÃO: O ensaio NGS projetado para genotipar regiões codificadoras de RH foi eficaz e preciso na identificação de variantes. A estratégia proposta esclareceu o fenótipo Rh da maioria dos pacientes, melhorando o suporte à transfusão.