Production and purification of interferon alpha-2b from Escherichia coli cultures using alternative platforms

• Autor(a) principal: Antunes, Joana Raquel Amaral
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: eng
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10773/22542
• topic: Biotecnologia; Proteínas recombinantes - Purificação; Biofármacos; Cromatografia líquida; Electroforese de proteínas; Hepatite - Tratamento

A indústria biofarmacêutica tem vindo a desenvolver diferentes tipos de biofármacos para o tratamento de diversas doenças. A maioria das proteínas terapêuticas são produzidas através da tecnologia do DNA recombinante, e purificadas utilizando técnicas convencionais, tais como a precipitação com sais, eletroforese e cromatografia. O interferão alfa-2b (IFNα-2b) é uma proteína terapêutica de ação imunomoduladora com atividade antiviral e antiproliferativa, que é geralmente obtida a partir de culturas de Escherichia coli, e utilizada no tratamento de doenças humanas, tais como a hepatite C, melanomas, alguns linfomas e leucemias, entre outras. Embora a fase de produção recombinante do IFNα-2b já tenha sido amplamente estudada e otimizada, a sua recuperação e purificação assumem-se como os passos economicamente limitantes do processo global de produção. Neste estudo, o IFNα-2b foi produzido na forma de corpos de inclusão utilizando culturas de BL21, no meio SOB, após 3 h de indução. A recuperação desta fração englobou vários passos, tendo sido alcançado um protocolo final que inclui: 1) Lavagem com Triton-X a 1%; 2) Lavagem com ureia a 4 M; e 3) Solubilização em meio alcalino, com ureia a 8 M. Alterando as condições de produção conseguiu-se também produzir e recuperar parte da proteína alvo na forma solúvel, embora com menor rendimento. O IFNα-2b previamente solubilizado foi purificado através de cromatografia aniónica, tendo sido obtido na sua forma biologicamente ativa com uma pureza superior a 95%. Como técnica alternativa de purificação utilizaram-se sistemas aquosos bifásicos constituídos por vários líquidos iónicos e tampão fosfato. Apesar de os resultados serem menos promissores, este estudo permitiu estudar plataformas alternativas para a recuperação e purificação do IFNα-2b através da aplicação de sistemas aquosos bifásicos.