Contribuição do efluxo para a emergência da resistência em bactérias persistentes

• Autor(a) principal: COSTA, Ana Raquel Esteves
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10362/53496
• topic: Ciências biomédicas; Biologia molecular; Efluxo de antibióticos; Resistência aos antibióticos; Celulas persistentes; Tolerância; E. coli; Domínio/Área Científica::Ciências Médicas

O efluxo de antibióticos é um importante mecanismo de resistência em bactérias requerendo o desenvolvimento de novas abordagens terapêuticas que possam ajudar no tratamento de infecções causadas por estas bactérias. O objectivo deste trabalho consistiu no estudo da contribuição da actividade de efluxo na emergência da resistência aos antibióticos em células persistentes, estabelecendo metodologias para a sua identificação e caracterização, bem como determinar combinações sinérgicas, entre fontes de carbono (FC), antibióticos e inibidores efluxo (IEs), que poderão ser usados numa terapêutica combinada com antibióticos e IEs no tratamento de infecções bacterianas crónicas e persistentes. Inicialmente estudamos o efeito de FC e IEs na susceptibilidade aos antibióticos, através do método de Kirky-Bauer, em três estirpes isogénicas de Escherichia coli bem caracterizadas quanto a actividade de efluxo. A segunda parte do trabalho consistiu na optimização de metodologias para obtenção de células persistentes e sua caracterização através da determinação do perfil de susceptibilidade aos antibióticos, IEs e FC; ensaios de sinergismo entre antibióticos e IEs e/ou FC; e por fim análise da existência de sistemas de efluxo activos por fluorometria em tempo real usando brometo de etídio. Os resultados obtidos demonstraram que as FC mais eficazes no aumento da susceptibilidade aos antibióticos foram a glucose, o glicerol, o piruvato e o manitol e os IEs CCCP e CPZ foram os inibidores mais eficientes em promover o aumento da susceptibilidade aos antibióticos nas estirpes estudadas. Deste modo, a glucose, piruvato, manitol, CCCP e CPZ foram seleccionados para serem testados em células persistentes de E. coli. Os resultados obtidos durante a segunda parte do trabalho possibilitaram-nos demonstrar a existência de sistemas de efluxo activos em células persistentes de E. coli, os quais podem ser inibidos na presença de compostos IEs combinados ou não com FC. Os resultados obtidos demonstram a importância do efluxo como mecanismo de sobrevivência em células persistentes de E. coli. A utilidade terapêutica de compostos que possuem capacidade para inibir bombas de efluxo em células persistentes, potenciando assim o efeito dos antibióticos, pode aumentar a eficácia e utilidade clinica dos antibióticos actualmente utilizados na terapêutica destas infecções.